PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:大豆RR PCR试剂盒
英文名称:详见说明书
编号: FSP2454
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
小鼠白血病细胞,P388细胞anti- WDR38 antibody2,3-二氟吡啶兔胸腺成纤维细胞
小鼠膀胱癌细胞,MB49细胞anti- WDR4 antibody2,3-二氟吡啶兔胸腺基质细胞
小鼠成肌细胞,C2C12细胞anti- WDR40A antibody4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物兔胸腺上皮细胞
小鼠成纤维细胞,L929细胞anti- WDR45 antibody4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物兔胸腺细胞
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞,RAW 264.7细胞anti- WDR46 antibody4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物兔雪旺细胞
小鼠单核巨噬细胞,J774A.1细胞anti- WDR5 antibody4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物兔牙髓干细胞
小鼠肺上皮细胞,TC-1细胞anti- WDR55 antibody2,4-二氟吡啶兔牙周膜成纤维细胞
小鼠肝癌细胞,H22细胞anti- WDR6 antibody2,4-二氟吡啶兔牙周膜干细胞
大豆RR PCR试剂盒Ophiostoma seticolle (Davidson) de Hoog et ..Mouse Anti-Rabbit IgM 小鼠抗兔IgM 呋喃唑酮猫瘟病毒抗原(FPV)检测试纸条
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Mouse Anti-rat IgG 小鼠抗大鼠IgG 雄烯二酮猫瘟病毒抗原(FPV)检测试纸条
freeze-driedMouse Anti-Bov IgG 小鼠抗牛IgG 二十六烷犬布鲁氏杆菌抗体检测试纸条
Serratia marcescens BizioMouse Anti-Guinea pig IgG 小鼠抗豚鼠IgG 丙环唑孕酮检测试纸条
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Rabbit Anti-Avidin 兔抗亲和素 酒石酸美托洛尔犬瘟热病毒抗原(CDV)和犬腺病毒Ⅱ型抗原(CAV)检测试纸条
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Rabbit Anti-Biotin 兔抗生物素抗体IgG 头孢呋辛钠犬细小病毒抗体(CPV)检测试纸条
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Rabbit Anti-Bov IgG 兔抗牛IgG 氯己定犬瘟热病毒抗体(CDV)检测试纸条
Porphyromonas asaccharolytica (Holdeman and ..Rabbit Anti-Bovine IgM 兔抗牛IgM 亚麻酸犬细小病毒抗原(CPV)和犬抗原(CCV)检测试纸条
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。