大肠埃希菌(大肠O)stx(bp)和stx(bp)常规PCR检测试剂盒

产品名称：大肠埃希菌(大肠O)stx(bp)和stx(bp)常规PCR检测试剂盒
英文名称：详见说明书
编号： FSP2444
分类：PCR检测试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、产品仅供科研制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
数据采集：
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，吸收光谱在 471nm，结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm，发射光谱在 530nm。
数据处理:
以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
人舌鳞癌细胞，Tca-8113细胞anti- Visfatin antibody2,3-二甲基苯硼酸兔冠状动脉内皮细胞

人神经胶质瘤细胞，LN-18细胞anti- vitamin D binding protein antibody2,3-二甲基苯硼酸兔冠状动脉平滑肌细胞

人神经母细胞瘤细胞，SH-SY5Y细胞anti- Vitamin D binding protein antibody3,3'-二甲氧基联苯胺兔海马神经元

人神经母细胞瘤细胞，SK-N-SH细胞anti- Vitronectin antibody3,3'-二甲氧基联苯胺兔海绵体平滑肌细胞

人神经内分泌分化的结肠癌细胞上皮细胞，LCC18细胞anti- VLDLR antibody3,3'-二甲氧基联苯胺兔颌下腺上皮细胞

人神经内分泌前列腺癌细胞，NCI-H660细胞anti- VMA21 antibody二苯氨基脲兔滑膜成纤维细胞

人肾癌Wilms细胞，G401细胞anti- VMAT2 antibody二苯氨基脲兔脊髓神经元

人肾癌细胞，A498细胞anti- VMO1 antibody脱氢乙酸兔甲状腺成纤维细胞
大肠埃希菌(大肠O)stx(bp)和stx(bp)常规PCR检测试剂盒human immunodeficiency virus - 1Protein C inhibitor/SerpinA5  蛋白C抑制因子抗体 (R)-1-Boc-3-二甲氨基吡咯烷黄曲霉毒素B1免疫亲和柱

freeze-driedRobo  轴突导向受体抗体 4,6-二氨基-2-巯基嘧啶呕吐毒素免疫亲和柱

Podospora bicolor Cailleux, teleomorphRobo4  肿瘤血管内皮调节蛋白Robo4抗体 2,5-二氟-3-甲基苯腈呕吐毒素免疫亲和柱

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Klotho  Klotho多肽蛋白抗体 4-氨基-2-氯-3-氟苯酚玉米赤霉烯酮免疫亲和柱

Microsporum cookei Ajello, anamorphEPDR1  哺乳动物室管膜相关蛋白1抗体 3-三氟甲基-1H-5-氯吡唑玉米赤霉烯酮免疫亲和柱

Phaeosphaeria halima (Johnson) Shoemaker et ..ADAMTSL2  整合素样金属蛋白酶与凝血酶样2蛋白抗体 四-(4-甲氧基苯)乙烯赭曲霉毒素A免疫亲和柱

Fusarium oxysporum f. sp.lycopersici (Sa ..Myosin heavy chain 1  肌球蛋白重链抗体 (9-苯基-9H-咔唑-2-基)硼酸可溶性表达宿主菌HB2151

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..TBCD4/TBC1D4  TBC结构域TBCD4蛋白抗体 6-乙基吡啶-3-硼酸融合表达宿主菌TG1