PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:苏丹埃博拉病毒PCR试剂盒
英文名称:Sudan Ebola Virus RTPCR
编号: FSP2272
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
ZNF268锌指脂蛋白-1c抗体特价促销anti- SNRPD2 antibody[1,1'-双(二-苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II),二氯甲烷复合物(1:1)O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-二吡咯基脲六氟磷酸酯(HBPyU)
ZNF268锌指脂蛋白抗体特价促销anti- SNRPD2 antibody双(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮酸)铜(II)(苯并三唑-1-基氧基)二哌啶基脲六氟磷酸酯(HBPipU)
ZNF300锌指蛋白300抗体特价促销anti- SNRPD3 antibody双(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮酸)铜(II)O-[(乙氧基羰基)氰基甲胺]-N,N,N',N'-四甲基硫脲六氟磷酸盐
ZNF307锌指蛋白307抗体特价促销anti- SNRPE antibody碱性品红2-氟-1,3-二甲基氯化咪唑翁六氟磷酸酯(DFIH)
ZNF431锌指蛋白431抗体特价促销anti- SNRPF antibody苯菌灵2-氯-1-甲基吡啶碘化物(CMPI)
ZNF474/ZFP106锌指蛋白474抗体特价促销anti- SNRPG antibody苯菌灵2-氯-1,3-二甲基氯化咪唑翁四氟硼酸酯(CIB)
ZO-1胞质紧密粘连蛋白1抗体(闭锁小带蛋白1)特价促销anti- SNRPN antibody4,6-二(二苯基膦)吩嗪溴代三(二甲基氨基)磷六氟磷酸盐
ZW10 peptide着丝粒蛋白抗体特价促销anti- SNUPN antibody4,6-二(二苯基膦)吩嗪环丁基甲醇
苏丹埃博拉病毒PCR试剂盒Porcine Interleukin 13,IL-13 ELISA试剂盒NOS-2/iNOS 一氧化氮合成酶-2抗体(诱导型)5-氟-2-硝基苯甲醛 乙二胺四乙酸二钠
Porcine interleukin 17,IL-17 ELISA试剂盒NOS-2/iNOS 一氧化氮合成酶-2抗体(诱导型)5-氯-2-甲基苯甲酸 3-苄胺基丙胺
Porcine Interleukin 18,IL-18 ELISA试剂盒NOS-3/eNOS 一氧化氮合成酶-3抗体(内皮型)2-溴-6-甲氧基苯甲酸 2',3',4'-三甲氧基苯乙酮
Porcine Interleukin 1α ,IL-1α ELISA试剂盒Phospho-eNOS(Ser1177) 磷酸化一氧化氮合成酶3抗体(内皮型)D-亮氨醇 咪唑[1,2-A]吡啶-6-甲酸
Porcine Interleukin 1β,IL-1β ELISA试剂盒Phospho-eNOS (Thr113) 磷酸化一氧化氮合成酶3抗体(内皮型)2,3-二溴丙醇 反式-2-己烯酸甲酯
Porcine interleukin 2,IL-2 ELISA试剂盒Phospho-eNOS(Thr495) 磷酸化一氧化氮合成酶3抗体(内皮型)5-甲氧基-2-甲基苯胺 2-氨基-2,3-二甲基丁腈
Porcine interleukin 3,IL-3 ELISA试剂盒Notch1/MOTC 跨膜受体蛋白Notch-1抗体硝苯地平 泮托拉唑钠
Porcine interleukin 4,IL-4 ELISA试剂盒Notch 2 跨膜受体蛋白Notch-2抗体2-氯喹噁啉 右佐匹克隆
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。