PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:犬巨球菌PCR检测试剂盒
英文名称:Macrococcus canisPCR
编号: FSP1855
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
CYP7B1胆固醇25α7羟化酶抗体特价促销anti- LRMP antibody饮料镁离子浓度酶反应光谱法定量检测试剂盒γ-氨基丁酸A受体相关膜蛋白3
CYP8A1/PTGIS前列环素合成酶抗体特价促销anti- LRP2BP antibody食物镁离子浓度酶反应光谱法定量检测试剂盒锌指蛋白288抗体
CYP21胆固醇21-羟化酶抗体特价促销anti- LRP2-Specific antibody环境镁离子浓度酶反应光谱法定量检测试剂盒锌指蛋白ZBTB38抗体
CYP2C19细胞色素P450 2C19抗体特价促销anti- LRP5 antibody细菌镁离子浓度酶反应光谱法定量检测试剂盒锌指蛋白693抗体
CYP24A1细胞色素P450 24A1抗体特价促销anti- LRPAP1 antibody酵母镁离子浓度酶反应光谱法定量检测试剂盒锌指蛋白ZBTB12抗体
CYP27A1胆固醇27α羟化酶抗体特价促销anti- LRPPRC antibody细胞硬脂酰辅酶A去饱和酶(STEAROYL COA DESATURASE)活性光谱法定量检测试剂盒锌指蛋白924抗体
CYP450细胞色素P450单氧化酶抗体特价促销anti- LRR 1 antibody组织硬脂酰辅酶A去饱和酶(STEAROYL COA DEHYDROGENASE)活性光谱法定量检测试剂盒锌指蛋白297抗体
RRAGARAS相关GTP结合蛋白A抗体特价促销anti- LRRC1 antibody细胞短链脂酰辅酶A合成酶(ACYL COA SYNTHETASE)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒NFκB激活蛋白205抗体
犬巨球菌PCR检测试剂盒蓝色葡聚糖2000 Dextran Blue 2000 现货C4orf33 4号染色体开放阅读框33抗体 4-(3-吡啶基)苯硼酸频哪醇酯Isatin;靛红/吲哚-2,3-二酮
TEMED 四甲基乙二胺 现货C4orf44 4号染色体开放阅读框44抗体 7-氨基庚酸Coumarin;香豆素
Actinomycin D 放线菌素DC5ORF33 5号染色体开放阅读框33抗体 3-溴-6-氯-2-吡啶甲酸6-Methylcoumarin;6-甲基香豆素
脂质体2000转染试剂 Lipofectamine 2000 ReagentKappa-casein/CSN3 κ-酪蛋白抗体 顺-2-已烯-1-醇Scopoletin;东莨菪内酯
Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 1 Human 现货供应Beta-casein β-酪蛋白抗体 3-甲基-2-硝基三氟甲苯Veratryl alcohol;藜芦醇
6×高蛋白含量DNA上样缓冲液Alpha s1 Casein α-s1酪蛋白抗体 叔丁基二苯基硅烷基三氟甲磺酸酯3,4-Dimethoxybenzoic acid;藜芦酸
6×高蛋白含量DNA上样缓冲液Alpha s2 Casein α-s2酪蛋白抗体 3-溴-5-氯三氟甲苯Enrofloxacin;恩诺沙星
6×橙黄DNA上样缓冲液DRAM DNA损伤自噬调整蛋白抗体 5-溴-2-氯-3-碘吡啶Guaifenesin;愈创甘油醚
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。