PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:多子小瓜虫PCR检测试剂盒
英文名称:Ichthyophthirius multifiisPCR
编号: FSP1789
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
DBC2癌基因删除蛋白2抗体特价促销anti- INSC antibody细胞JNK2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)丝氨酸/苏氨酸激酶TLK2抗体
FAT/CDHF7/FAT1钙粘蛋白家族成员7抗体特价促销anti- INSIG1 antibody组织JNK2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)共济失调毛细血管扩张症D相关蛋白抗体
CD36/PAS-4CD36抗体特价促销anti- INSIG2 antibody细胞JNK3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)转化生长因子β调节蛋白4抗体
GAS7/Growth Arrest Specific Protein 7生长休止特定蛋白7抗体特价促销anti- INSL3 antibody组织JNK3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)肿瘤/睾丸抗原44抗体
EB3微管相关蛋白EB家族3抗体特价促销anti- INSR antibody细胞MAPKAP KINASE2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)乳腺癌、胃癌抗原GA55抗体
CD4CD4抗体特价促销anti- INSRR antibody组织MAPKAP KINASE2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)转录因子Tbx5抗体
CD4CD4抗体特价促销anti- Insulin antibody细胞MAPKAP KINASE3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)跨膜蛋白9家族成员4抗体
CD7CD7抗体特价促销anti- Insulin antibody组织MAPKAP KINASE3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)BTRC2蛋白抗体
多子小瓜虫PCR检测试剂盒甲基-组蛋白H3-K27免疫沉淀试剂盒 EpiQuik Methyl-Histone H3-K27 ChIP KitWnt16 信号通路Wnt16抗体蛤弧菌探针法荧光定量PCR试剂盒Cyclopentadecanone;环十五烷酮
组织甲基组蛋白H3-K27免疫沉淀试剂盒 EpiQuik Tissue Methyl-Histone H3-K27 ChIP KitCMYA2/PDE4DIP 心肌病相关蛋白2创伤弧菌探针法荧光定量PCR试剂盒Heptadecanoic Acid;十七烷酸
乙酰化组蛋白H3免疫沉淀试剂盒 EpiQuik Acetyl-Histone H3 ChIP KitSFRP2/SARP1 分泌细胞凋亡相关蛋白1抗体田鼠痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒Chloroquine Diphosphate;磷酸氯喹
乙酰化组蛋白H4免疫沉淀试剂盒 EpiQuik Acetyl-Histone H4 ChIP KitSMARCD3 肌动蛋白依赖染色质调控因子SMARCD3蛋白抗体多瘤病毒探针法荧光定量PCR试剂盒Orotic Acid Monohydrate;乳清酸一水合物
组织乙酰化组蛋白H3免疫沉淀试剂盒 EpiQuik Tissue Acetyl-Histone H3 ChIP KitSRFBP1 血清应答因子结合蛋白1抗体韦塞尔斯布朗病毒探针法荧光定量PCR试剂盒Echinocystic acid;刺囊酸
组织乙酰化组蛋白H4免疫沉淀试剂盒 EpiQuik Tissue Acetyl-Histone H4 ChIP KitREEP5 受体表达蛋白5/息肉相关蛋白抗体白斑综合症病毒探针法荧光定量PCR试剂盒Wogonoside;汉黄芩苷
甲基CpG结合域蛋白2免疫沉淀试剂盒 EpiQuik Methyl-CpG Binding Domain Protein 2 ChIP KitC5ORF4 5号染色体开放阅读框4抗体高首鲟虹彩病毒探针法荧光定量PCR试剂盒Diosgenin;薯蓣皂苷元
组织甲基CpG结合域蛋白2免疫沉淀试剂盒 EpiQuik Tissue Methyl-CpG Binding Domain Protein 2 ChIP KitC5orf35 5号染色体开放阅读框35抗体牛羚关联恶性卡他热病毒探针法荧光定量PCR试剂盒5-Fluorouracil;5-氟尿嘧啶
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。