PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:流感嗜血杆菌PCR试剂盒
英文名称:Haemophilus influenzaePCR
编号: FSP1720
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
MTMR14肌管素相关蛋白14抗体特价促销anti- HDAC1-specific antibody真菌/酵母β-淀粉酶(β-AMYLASE)活性PNPG5酶偶联比色法定量检测试剂胰岛细胞再生因子ICRF抗体
Pumilio 1PUM1蛋白抗体特价促销anti- HDAC2 antibody细菌β-淀粉酶(β-AMYLASE)活性PNPG5酶偶联比色法定量检测试剂肾素/血管紧张素形成酶Ren1抗体
Exportin 5核输出蛋白5抗体特价促销anti- HDAC2 antibody植物β-淀粉酶(β-AMYLASE)活性DNS比色法定量检测试剂盒分泌性蛋白RSPO1抗体
PTBP1核糖核酸结合蛋白1抗体特价促销anti- HDAC2-specific antibody真菌/酵母β-淀粉酶(β-AMYLASE)活性DNS比色法定量检测试剂盒原癌基因酪氨酸蛋白激酶受体RET/多发性内分泌腺瘤和甲状腺髓样癌蛋白抗体
phospho-GIT1(Tyr554) 磷酸化G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白1特价促销anti- HDAC3 antibody细菌β-淀粉酶(β-AMYLASE)活性DNS比色法定量检测试剂盒磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶受体RET抗体
SH3TC2脱髓鞘相关蛋白SH3TC2N抗体特价促销anti- HDAC3-specific antibody细胞a-淀粉酶(a-AMYLASE)活性EPS-G7酶偶联比色法定量检测试剂盒癌基因RAS相关蛋白Rab25抗体
Phospho-p53BP1 (Ser1778)磷酸化p53结合蛋白1抗体特价促销anti- HDAC4 antibody组织a-淀粉酶(a-AMYLASE)活性EPS-G7酶偶联比色法定量检测试剂盒胰腺癌转移相关蛋白RLLM1抗体
ATRIP/TREX1系统性红斑狼疮相关蛋白TREX1抗体特价促销anti- HDAC4 antibody植物a-淀粉酶(a-AMYLASE)活性EPS-G7酶偶联比色法定量检测试剂盒RNA结合基因蛋白3抗体
流感嗜血杆菌PCR试剂盒RBP-JK luciferase reporter plasmid (RBP-JK萤火虫荧光素酶报告基因质粒) OLIG1 少突胶质细胞转录因子1乙型肝炎病毒通用型探针法荧光定量PCR试剂盒Indole;吲哚
RAR luciferase reporter plasmid (RAR萤火虫荧光素酶报告基因质粒) SH2B1 SH2B蛋白抗体庚型肝炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒Vanillin;香兰素/香草醛
Sox2 luciferase reporter plasmid (Sox2 萤火虫荧光素酶报告基因质粒) Coronin 1a 肌动蛋白结合蛋白CORO1A抗体肝胰腺细小病毒探针法荧光定量PCR试剂盒Vanillic acid;香草酸
SP1 luciferase reporter plasmid (SP1萤火虫荧光素酶报告基因质粒) Nitrotyrosine 硝基酪氨酸抗体单纯疱疹病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒Benzyladenine;6-苄基腺嘌呤/6-苄氨基腺嘌呤
SREBP luciferase reporter plasmid (SREBP荧光素酶报告基因质粒) XDH/Xanthine Oxidase 黄嘌呤氧化酶抗体单纯疱疹病毒2型探针法荧光定量PCR试剂盒Propyl gallate;没食子酸丙酯
STAT1 luciferase reporter plasmid (STAT1萤火虫荧光素酶报告基因质粒) phospho-CstF64(Ser498) 磷酸化细胞分裂相关蛋白CSTF64抗体单纯疱疹病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒Sulfamonomethoxine;磺胺间甲氧嘧啶
STAT3 luciferase reporter plasmid (STAT3萤火虫荧光素酶报告基因质粒) Hemoglobin Beta 血红蛋白β抗体火鸡疱疹病毒探针法荧光定量PCR试剂盒Sulfadimethoxine;磺胺二甲氧嗪
VDR(Vitamin D Receptor) luciferase reporter plasmid (VDR萤火虫荧光素酶报告基因质粒)Desmuslin 中间丝蛋白β-synemin抗体松鼠猴疱疹病毒探针法荧光定量PCR试剂盒Cinnamyl Cinnamate;肉桂酸肉桂酯/桂酸桂酯
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。