PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:盖塔病毒PCR试剂盒
英文名称:Getah virus(GETV)RTPCRPCR
编号: FSP1696
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
CHL1/CALL神经细胞粘附分子CALL抗体特价促销anti- GPR58/TAAR2 antibody血液结构型内皮细胞一氧化氮合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性荧光定量检测试剂盒前列腺肿瘤高表达蛋白1抗体
COL6A5/Collagen VI alpha 56型胶原蛋白α5抗体特价促销anti- GPR81 antibody体液结构型内皮细胞一氧化氮合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性荧光定量检测试剂盒嘌呤ATP受体抗体
CPA6胰羧肽酶A6抗体特价促销anti- GPR83 antibody细胞黄嘌呤氧化酶活性比色法定量检测试剂盒蛋白磷酸酶γ1抗体
GJC2/Connexin 47间隙连接蛋白47抗体特价促销anti- GPRASP1-Specific antibody组织黄嘌呤氧化酶活性比色法定量检测试剂盒核苷酸还原酶M2B抗体
Sin3b转录抑制蛋白Sin3b抗体特价促销anti- GPRASP2 antibody体液黄嘌呤氧化酶活性比色法定量检测试剂盒磷酸二酯酶4A抗体
HAPLN2透明质酸及粘蛋白2抗体特价促销anti- GPRC5A/RAI3 antibody细胞黄嘌呤氧化酶活性荧光定量检测试剂盒一种肿瘤抑制基因抗体(C端)
HAS3透明质酸合成酶3抗体特价促销anti- GPRIN1 antibody组织黄嘌呤氧化酶活性荧光定量检测试剂盒Patched/PTCH抗体
KAL1卡尔曼综合征基因1抗体特价促销anti- GPRIN3-Specific antibody体液黄嘌呤氧化酶活性荧光定量检测试剂盒Pan ras抗体
盖塔病毒PCR试剂盒Prostaglandin (PG) E1 前列腺素E1Ube2L3 泛素蛋白连接酶L3抗体鲤疱疹病毒3型探针法荧光定量PCR试剂盒硝酸纤维素膜(NC膜0.22um)
Prostaglandin (PG) D2 前列腺素D2Ube2N/UBC13 泛素蛋白连接酶2N抗体鹌鹑奇异线虫探针法荧光定量PCR试剂盒PCR八连排管(平),只有管 八联排管 0.2ml PCR8联排管,透明, 125 排/盒,10盒/箱
Prostaglandin (PG) B2 前列腺素B2UBE2E3 泛素蛋白连接酶E3抗体猪囊尾蚴探针法荧光定量PCR试剂盒PCR八连排管带盖(鼓),一套都有 八联排管 0.2ml无色凸盖PCR8联排管(含盖),125 排/盒,10盒/箱
Prostaglandin (PG) A1 前列腺素A1UBE2E2 泛素蛋白连接酶2E2抗体巨细胞病毒探针法荧光定量PCR试剂盒PCR八连排管带盖(平),一套都有 八联排管 0.2ml,PCR8联排管,带平盖,无色,125排/盒,10盒/箱
20×MOPS-SDS Running Buffer 20×MOPS-SDS电泳缓冲液UBE2D4 泛素蛋白连接酶D4抗体质型多角体病毒探针法荧光定量PCR试剂盒PCR管(离心管) 0.2ml透明平盖PCR薄壁管,1000/盒,10盒/箱
Deoxyribonuclease I (DNase I) from bovine pancreas 脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺UBE2D3 泛素蛋白连接酶D3抗体指环虫属通用探针法荧光定量PCR试剂盒PCR管(离心管) 0.2ml PCR 薄壁管(圆盖)无色,1000支/盒;10盒/箱
Papain from papaya Latex,≥15 units/mg protein 木瓜蛋白酶,来源于木瓜乳液UBE2D1 泛素蛋白连接酶D1抗体节片代凡绦虫探针法荧光定量PCR试剂盒PCR管(离心管) 0.5ml 无色PCR平盖薄壁管,1000个/盒,10盒/箱
Surface RNase Remover (with Spray Bottle) 固相RNase清除剂(含喷雾瓶)UBE2C 泛素蛋白连接酶C抗体布鲁塞尔德克酵母探针法荧光定量PCR试剂盒PCR八连排盖(平),只有盖子 ,荧光定量 0.2ml透明PCR八排管盖(荧光定量专用),125 排/盒,10盒/箱
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。