PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:黄杆菌通用PCR试剂盒
英文名称:Flavobacterium spp.PCR
编号: FSP1660
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
C1orf180/AIDA1号染色体开放阅读框80抗体特价促销anti- GALNTL2 antibody石蜡切片中性脂质苏丹黑间接染色试剂盒早老素γ分泌酶2抗体
APP/ABPPAPP/ABPP淀粉样肽前体蛋白抗体特价促销anti- GALNTL5 antibody石蜡切片中性脂质苏丹黑直接染色试剂盒丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶PIM3抗体
APP695 (CT)淀粉样肽前体蛋白抗体(C端)特价促销anti- GALP antibody冰冻切片中性脂质苏丹黑染色试剂盒组蛋白精氨酸甲基转移酶5抗体
EML4/C2orf180限制过度增殖相关蛋白EML4抗体特价促销anti- GALT antibody细胞中性脂质油红O染色试剂盒肿瘤错配修复基因PMS1抗体
C2orf242号染色体开放阅读框24抗体特价促销anti- gamma Actin antibody石蜡切片中性脂质油红O间接染色试剂盒泛素连接酶抗体
C2orf18/ANT2BP2号染色体开放阅读框18抗体特价促销anti- Gamma adaptin antibody石蜡切片中性脂质油红O直接染色试剂盒原钙粘蛋白γA7抗体
APR3/C2orf28凋亡相关蛋白3抗体特价促销anti- Gamma adducin antibody冰冻切片中性脂质油红O染色试剂盒原钙粘蛋白γA8抗体
ECRG4/C2orf40食道癌相关基因4蛋白抗体特价促销anti- gamma catenin antibody细胞总胆固醇高氯酸萘醌(PAN)染色试剂盒原钙粘蛋白γA9抗体
黄杆菌通用PCR试剂盒Escherichia coli NanoLucsup®/supARRDC2 抑制蛋白结构域蛋白2抗体N-CBZ-D-脯氨酸Cefadroxil 头孢羟氨苄一水
Brevundimonas diminuta (Leifson and Hugh) S ..ARRDC3 抑制蛋白结构域蛋白3抗体鲍疱疹样病毒染料法荧光定量PCR试剂盒Cefazolin sodium salt 头孢唑啉钠
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..ARRDC4 抑制蛋白结构域蛋白4抗体鲍疱疹样病毒探针法荧光定量PCR试剂盒Cefepime hydrochloride 头孢吡肟盐酸盐
Clostridium akagii Kuhner et al.CCDC134 卷曲螺旋结构域蛋白134抗体鲍肌肉萎缩症病毒探针法荧光定量PCR试剂盒Cefepime 头孢吡肟
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..CCDC58 卷曲螺旋结构域蛋白58抗体鲍球状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒Cefotaxime,Sodium Salt 噻孢霉素
Sclerotium hydrophilum Saccardo, anamorphβ-Amyloid(1-42) β淀粉样肽(1-42)抗体伞枝梨头霉探针法荧光定量PCR试剂盒Cefotaxime,Sodium Salt 噻孢霉素
Homo sapiens, humanCCDC94 卷曲螺旋结构域蛋白94抗体多食棘阿米巴属通用探针法荧光定量PCR试剂盒Cefotaxime,Sodium Salt 噻孢霉素
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..CCDC135 卷曲螺旋结构域蛋白135抗体武氏盾螨探针法荧光定量PCR试剂盒Cefotaxime,Sodium Salt 噻孢霉素
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。