PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:虾肝肠微胞虫PCR试剂盒
英文名称:Enterocytozoon hepatopenaei(EHP)PCR
编号: FSP1612
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
TSPAN13/NET-6四分子交联体13抗体(四旋蛋白)特价促销anti- FAM111B antibody通用型抗酒石酸酸性磷酸酶(STRACP)活性比色法定量检测试剂盒氧化固醇结合蛋白8抗体
TSPAN14四分子交联体14抗体(四旋蛋白)特价促销anti- FAM114A1 antibody红细胞型抗酒石酸酸性磷酸酶(STRACP)活性比色法定量检测试剂盒少突胶质细胞转录因子1
TSPAN16/TM4-B四分子交联体16抗体(四旋蛋白)特价促销anti- FAM116B antibody组织巨噬细胞型抗酒石酸酸性磷酸酶(STRACP)活性比色法定量检测试剂盒肿瘤/睾丸抗原117
TSPAN17/FBX23四分子交联体17抗体(四旋蛋白)特价促销anti- FAM117B antibody破骨细胞型抗酒石酸酸性磷酸酶(STRACP)活性比色法定量检测试剂盒阳离子转运器1抗体
TSPAN15/NET-7四分子交联体15抗体(四旋蛋白)特价促销anti- FAM118B antibody睾丸型酸性磷酸酶(TACP)活性比色法定量检测试剂盒阳离子转运蛋白2抗体
TSPAN20/UPIb四分子交联体20抗体(四旋蛋白)特价促销anti- FAM119A antibody细胞果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(ALD)定量检测试剂盒骨保护蛋白/护骨素抗体
TMIGD1跨膜TMIGD1蛋白抗体特价促销anti- FAM120A antibody组织果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(ALD)定量检测试剂盒骨保护蛋白配体抗体(破骨细胞分化因子)
Tal1T细胞急性淋巴细胞性白血病1蛋白/淋巴瘤蛋白5抗体特价促销anti- FAM124B antibody血液果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(ALD)定量检测试剂盒骨桥蛋白抗体(分泌型磷蛋白1)
虾肝肠微胞虫PCR试剂盒Human MEMO1 ELISA KitUBTD1 泛素结构域蛋白1抗体1,1-硫代羰基二咪唑硝地平杂质B进口/国产GCMA/GCM1 绒毛膜特异性转录因子GCMa抗体含量:检查
Human MEK4 ELISA Kitphospho-AMPK alpha-1(Ser485+Ser491) 磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体1,1-硫代羰基二咪唑盐酸利多卡因进口/国产Desmocollin 1 桥粒糖蛋白1抗体含量:含量测定
Human MEN1 ELISA KitVRK1 牛痘病毒相关激酶1抗体(丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶VRK1)2-溴代异丁酸叔丁酯利多卡因进口/国产UACA 葡萄膜自身抗原Uaca抗体含量:含量测定
Human MEPCE ELISA Kitphospho-AMPK alpha-1/PRKAA1(Thr198) 磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体2-溴代异丁酸叔丁酯盐酸拉唑林进口/国产IL-6 白介6抗体含量:含量测定
Human ADH1A(Alcohol dehydrogenase 1A) ELISA KitZBTB2 锌指蛋白437抗体磷酸三丁酯盐酸利达嗪进口/国产Caveolin-2 细胞质膜微蛋白-2抗体含量:鉴别
Human MED12L ELISA KitPRKAA2/AMPK alpha 2 腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2抗体3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯盐酸卡替洛尔进口/国产AFP(A2) 胎蛋白单克隆抗体(包被)含量:鉴别
Human MED15 ELISA KitZNF415 锌指蛋白415抗体3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯七叶皂苷钠进口/国产AFP(A4) 胎蛋白单克隆抗体(检测)含量:含量测定
Human MED17 ELISA KitRetinoic acid induced 17 维甲酸诱导蛋白17抗体辛基三甲氧基硅烷黄豆苷元进口/国产BSCL2/SPG17 先天性脂肪代谢障碍蛋白2抗体(常染色体显性遗传痉挛性截瘫17)含量:含量测定
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。