PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:铅黄肠球菌PCR试剂盒
英文名称:Enterococcus casseliflavusPCR
编号: FSP1606
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
PGBD1/Cerebral protein 4脑蛋白4抗体特价促销anti- EXPH5 antibody冰冻切片制片预处理脱水液卵巢癌相关基因1抗体
PGBD3PGBD3蛋白抗体特价促销anti- EXT2 antibody冰冻切片制片处理OCT包埋液氧化应激诱导生长抑制因子1抗体
PGGT1β香叶烯基转移酶1β抗体特价促销anti- EXTL2 antibody细胞蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒-LEPTIN结肠癌过度表达蛋白1抗体
MYCBP2MYC结合蛋白2抗体特价促销anti- EXTL3 antibody载玻片细胞蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒-LEPTIN卵巢癌免疫反应抗原抗体
MURF3肌肉特定环指蛋白3抗体特价促销anti- EYA1 antibody冰冻切片组织蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒-LEPTIN口腔癌高表达的蛋白1抗体
MMS2/EDPF1肠细胞分化相关因子1抗体特价促销anti- EYA2 antibody石蜡切片组织蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒-LEPTIN氧化固醇结合蛋白4抗体
MKRN1/RNF61环指蛋白61抗体特价促销anti- EYA3 antibody载玻片细胞蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒-LEPTIN抗细胞凋亡蛋白OLFM44抗体
MKRN2/RNF62环指蛋白62抗体特价促销anti- EYA4 antibody冰冻切片组织蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒-LEPTIN固生蛋白M抗体
铅黄肠球菌PCR试剂盒Human MGAT4C ELISA KitBAT3/BAG6 Bcl2相关抗凋亡基因6抗体四甲基氢氧化铵溶液格列喹进口/国产CAMKK2 钙调蛋白激酶激酶β抗体含量:含量测定
Human mGluR1 ELISA KitCTNNBL1/Beta catenin like 1 β连环蛋白样蛋白1抗体四甲基氢氧化铵溶液格列吡嗪进口/国产IMPDH1 肌苷单酸脱氢酶1抗体含量:含量测定
Human KLK8(Kallikrein-8) ELISA KitDATF1 死亡相关转录因子1抗体四氯化锡(IV) 五水合物4-[2-(5-吡嗪-2-酰氨)]磺酰进口/国产STK38 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶38抗体含量:检查
Human MFSD7 ELISA KitTFDP2/DP2 转录因子E2F二聚体蛋白2抗体二硫化钨核黄酸钠进口/国产Phospho-Bcr(Tyr360) 酸化T淋巴细胞受体抗体含量:含量测定(HPLC)
Human mGluR2 ELISA KitEAF2 睾酮调节细胞凋亡诱导和肿瘤抑制基因抗体二缩三丙二醇二丙烯酸酯(stabilized with MEHQ)吉非罗齐进口/国产MIRK/Dyrk1B 双特异性酪氨酸酸化调节激酶1B含量:含量测定
Human MFSD8 ELISA KitFLI1 尤文肉瘤FLI1蛋白抗体二缩三丙二醇二丙烯酸酯(stabilized with MEHQ)尿进口/国产KIST/UHMK1 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶KIST抗体(激酶相互作用与白血病相关因)含量:含量测定
Human MGAT4C ELISA KitMDMX MDM2样P53蛋白结合抗体2,2'-硫代二乙酸高乌进口/国产NEK3 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Nek3抗体含量:含量测定
Human MGAT1 ELISA KitTMUB1 跨膜和泛素样结构域蛋白1抗体2,2'-硫代二乙酸酸依沙吖啶进口/国产TRIB2 MAPK调控蛋白TRB2抗体含量:含量测定
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。