PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:鸡减蛋综合征病毒PCR试剂盒
英文名称:Egg Drop Syndrome Virus1976(EDSV76)1976PCR
编号: FSP1582
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
RNF17环指蛋白17抗体特价促销anti- EIF4H antibodyTEM电镜免疫细胞化学HRP酶联DAB直接检测试剂盒(含HRP一抗)神经外营养蛋白2抗体
TRIM7/RNF90糖原生成素相互作用蛋白抗体特价促销anti- EIF5 antibodyTEM电镜免疫细胞化学AP酶联NBT/BCIP基础检测试剂盒(无一抗和二抗)脑特异性蛋白BPX抗体
TRIM6/RNF89环指蛋白89特价促销anti- EIF5A antibodyTEM电镜免疫细胞化学AP酶联NBT/BCIP间接检测试剂盒(含AP二抗)核纤层蛋白A识别因子抗体
RNF87环指蛋白87特价促销anti- EIF5A2 antibodyTEM电镜免疫细胞化学AP酶联NBT/BCIP完全间接检测试剂盒(含一抗和AP二抗)中性鞘磷脂2抗体
RNF86环指蛋白86特价促销anti- EIF5B antibodyTEM电镜免疫细胞化学AP酶联NBT/BCIP直接检测试剂盒(含AP一抗)核受体蛋白NR2E1抗体
RING2/RNF2环指蛋白2抗体特价促销anti- EIF6 antibody冰冻切片免疫组织化学HRP酶联DAB基础检测试剂盒(无一抗和二抗)N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感融合蛋白抗体
PCGF3/RNF3环指蛋白3抗体特价促销anti- ELAC2 antibody冰冻切片免疫组织化学HRP酶联DAB间接检测试剂盒(含HRP二抗)肾小球细胞粘附分子受体抗体
RNF40环指蛋白40抗体特价促销anti- Elastin antibody冰冻切片免疫组织化学HRP酶联DAB完全间接检测试剂盒 (含一抗和HRP二抗)硝基化α-突触核蛋白
鸡减蛋综合征病毒PCR试剂盒Human NNT ELISA KitPARP3 多腺苷二磷酸多聚酶3抗体/多聚ADP-核糖聚合酶3二水氧化三甲胺苄啶进口/国产Cystatin E/M 半胱氨酸蛋白酶抑制剂6抗体含量:HPLC法含量测定用
Human NPAS1 ELISA KitPARP4 多腺苷二磷酸多聚酶4抗体/多聚ADP-核糖聚合酶4三苯基膦三间磺酸三钠盐己酸羟孕进口/国产CRABP2 细胞维酸结合蛋白2抗体含量:含量测定
Human NNT ELISA KitDOCK1 细胞质分裂付出蛋白1抗体三苯基膦三间磺酸三钠盐己雌酚进口/国产CST7/Cystatin F 半胱氨酸蛋白酶抑制剂7抗体含量:含量测定
Human NMUR1 ELISA KitEDA2R/TNFRSF27 肿瘤坏死因子受体超家族成员27抗体四氢-吡喃-4-酮枸橼酸米芬进口/国产NBL1/DAND1 神经母细胞瘤抑瘤蛋白1抗体含量:含量测定
Human NOXA2/p67phox ELISA KitEDG1/CD363/S1P1 内皮细胞分化鞘脂G蛋白偶联受体1抗体四氢-吡喃-4-酮磺酸双氢麦角进口/国产DLL4/Delta 4 Notch信号通路Delta样配体4抗体含量:含量测定
Human NPAS1 ELISA KitFEM 1B FEM1B抗体3,3'-硫代二丙酸克唑进口/国产DPP2 溶酶体丝氨酸蛋白酶DPP2抗体含量:HPLC法含量测定
Human NO66/C14orf169 ELISA KitAIF 调亡诱导因子抗体3,3'-硫代二丙酸邻磺酰进口/国产FSTL1/FRP 卵泡相关蛋白1含量:检查
Human NPAS3 ELISA KitBACH1/BRIP1 乳腺癌易感基因相互作用蛋白1抗体3,3',5,5'-四甲基联苯胺6-巯呤进口/国产HPGD/PGDH1/Prostaglandin dehydrogenase 1 前列脱氢酶1抗体含量:检查
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。