PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:鲤疱疹病毒通用PCR试剂盒
英文名称:Cyprinid Herpesvirus(CyHV)PCR
编号: FSP1546
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
NIR1/RDGBA3膜相关磷脂转运蛋白抗体特价促销anti- DNAJA2 antibody真菌/酵母细胞染色质免疫沉淀分析(CHIP)完全试剂盒(包括抗体)甘露聚糖结合凝集素抗体
Fc ε RIα/Fc epsilon RIFC段IgE受体α多肽抗体特价促销anti- DNAJA4 antibody细胞甲基化组蛋白H3-K9染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒鸡马立克氏病火鸡疱疹抗体
ELL聚合酶延伸因子抗体特价促销anti- DNAJB1 antibody组织甲基化组蛋白H3-K9染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒胃动素抗体
KNDC1脑蛋白9抗体特价促销anti- DNAJB11 antibody植物甲基化组蛋白H3-K9染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒肿瘤转移相关蛋白1抗体
KCC2/SLC12A5神经细胞钾氯离子转运蛋白抗体特价促销anti- DNAJB12 antibody细胞甲基化组蛋白H3-K4染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒黑皮质素-1受体抗体
SPP24/SPP2分泌性磷蛋白24抗体特价促销anti- DNAJB13 antibody组织甲基化组蛋白H3-K4染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒褪黑素受体1B抗体
phospho-CaM I (Ser 101)磷酸化钙调节素抗体特价促销anti- DNAJB14 antibody细胞乙酰化组蛋白H3染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒多药耐药相关蛋白4抗体
phospho-SYT6(Thr418)磷酸化突触蛋白6抗体特价促销anti- DNAJB2 antibody组织乙酰化组蛋白H3染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒多药耐药相关蛋白5抗体
鲤疱疹病毒通用PCR试剂盒Human PDCD6IP ELISA KitCD66d/CEAM3 癌胚抗原相关细胞粘附分子3抗体四丁基碘化铵川芎嗪进口/国产Acinus Acinus抗体含量:HPLC≥98%
Human PDCL ELISA KitCLUAP1 成簇相关蛋白1抗体四丁基三溴化铵盐酸川芎嗪进口/国产phospho-Acinus(Ser1180) 酸化泡Acinus蛋白抗体含量:HPLC≥98%
Human PDCD7 ELISA KitCTAG1B/Cancer/testis antigen 1B 肿瘤/睾丸抗原1B四丁基三溴化铵异鼠李进口/国产Ack1 醋酸激酶1抗体含量:HPLC≥98%
Human PDK3 ELISA KitCTAG2 肿瘤/睾丸抗原2抗体4-叔丁基苯甲酸D-(+)-木糖进口/国产Phospho-Ack1(Tyr859/860) 酸化Ack1抗体含量:HPLC≥99%
Human PDLIM3 ELISA KitCTAGE5 皮肤T细胞淋巴瘤相关抗原5抗体(脑膜瘤表达抗原6)三羟甲基氨基甲烷盐酸盐积雪草苷进口/国产Phospho-Ack1(Tyr284) 酸化Ack1抗体含量:HPLC≥90%
Human PDLIM5 ELISA KitAGPAT1 溶血磷脂酰基转移酶抗体三羟甲基氨基甲烷盐酸盐羟积雪草苷进口/国产Phospho-Ack1(Tyr326) 酸化Ack1抗体含量:HPLC≥98%
Human PDLIM7 ELISA KitEBAG9/RCAS1 肿瘤相关表面抗原RCAS1抗体2,4,6-三氯苯酚积雪草酸进口/国产ACSL1 长链脂肪酸辅酶A连接酶1/2抗体含量:HPLC≥98%
Human PDP2 ELISA KitFAM120C 构成激活过氧化酶活化增生受体γ样蛋白2抗体2,4,6-三氯苯酚羟积雪草酸进口/国产ACTH (1-39) 促上皮质激(1-39)抗体含量:HPLC≥98%
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。