PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:刺激隐核虫PCR试剂盒
英文名称:Cryptocaryon irritansPCR
编号: FSP1534
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
Grpa半乳糖凝集素相关蛋白A抗体特价促销anti- DEXI antibody真菌/酵母细胞壁可溶性总蛋白制备试剂盒精氨酸/脯氨酸富含卷曲蛋白1抗体
Galectin 12/LGALS12半乳糖凝集素12抗体特价促销anti- DFB14 antibody真菌/酵母细胞壁完全可溶性总蛋白制备试剂盒微管相关蛋白9抗体
ANGPTL4/ARP4血管生成素样蛋白4抗体特价促销anti- DFF45/DFFA antibody真菌/酵母细胞细胞壁分离试剂盒有丝分裂驱动蛋白样1抗体
HAGHL羟基酰谷胱甘肽水解酶样蛋白抗体特价促销anti- DFNA5 antibody细胞可溶性总核蛋白制备试剂盒结核分枝杆菌抗体
HEATR7B2热休克蛋白受体家族蛋白7B2抗体特价促销anti- DGAT1 antibody组织可溶性总核蛋白制备试剂盒肌肉骨骼受体酪氨酸激酶抗体
HEBP2Heme结合蛋白2抗体特价促销anti- DGCR2 antibody细胞浆可溶性总蛋白制备试剂盒膜相关环指蛋白1抗体
HEPACAM2肝细胞粘附分子2抗体特价促销anti- DGCR8 antibody线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒膜相关环指蛋白2抗体
HEXDC氨基己糖苷酶D抗体特价促销anti- DGCR8 antibody高纯胞浆S100蛋白制备试剂盒兔抗小鼠IgA抗体
刺激隐核虫PCR试剂盒Human PIGB ELISA KitPSCD1 细胞附着蛋白PSCD1抗体2,4,6-三甲基吡啶对甲苯磺酸盐去姜黄进口/国产ABCG4 ABC膜转运蛋白抗体含量:HPLC≥96%
Human PIM2(Serine/threonine-protein kinase pim-2) ELISA KitGABRA5/GABA A Receptor alpha 5 γ1氨基丁酸受体α5/GABRα5抗体次氮基三乙酸钠盐双去姜黄进口/国产ABCG5 三酸苷结合转运蛋白G超家族成员5抗体含量:HPLC≥96%
Human PI3K p55(gamma) ELISA KitCaIPLA2/PLA2G6 胞浆钙独立磷脂酶A2抗体次氮基三乙酸钠盐莪术醇(姜黄醇)进口/国产ABCG8 三酸苷结合转运蛋白G超家族成员8抗体含量:HPLC≥98%
Human KLB(Beta-klotho) ELISA KitNetrin G1 ligand 轴突生长诱向因子G1配体抗体硫酸氧钛-硫酸水合物金丝桃苷进口/国产c-Abl/Abl1 非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体含量:HPLC≥98%
Human PIF1 ELISA KitNetrin 4 轴突生长诱向因子4抗体四氯乙烯金丝桃进口/国产phospho-c-Abl(Tyr134) 酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体含量:HPLC≥98%
Human PICK1 ELISA KitPAX4 配对盒同源基因4抗体反式-2,4-癸二烯醛绞股蓝皂苷进口/国产phospho-c-Abl(Tyr412) 酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体含量:UV≥98%
Human PIGK ELISA KitLaminin 5 层粘连蛋白5(laminin γ2)抗体反式-2,4-癸二烯醛苦杏仁苷进口/国产phospho-c-Abl(Tyr245) 酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体含量:HPLC≥98%
Human PIG3 ELISA KitUGCGL2 二磷酸葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶2抗体3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪盐酸盐苦参进口/国产phospho-c-Abl(Tyr204) 酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体含量:HPLC≥98%
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。