PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:病毒PCR试剂盒
英文名称:Colti RTPCR
编号: FSP1510
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
FAM160B1FAM160B1蛋白抗体特价促销anti- CYP2F1 antibody动物组织β-半乳糖苷酶报告基因活性高质敏感比色法定量检测试剂细胞周期调节蛋白P95抗体
FAM161BFAM161B蛋白抗体特价促销anti- CYP2J2 antibody细胞β-内酰胺酶报告基因活性荧光定量检测试剂盒肌球蛋白轻链6抗体
FAM164BFAM164B蛋白抗体特价促销anti- CYP2S1 antibody组织β-内酰胺酶报告基因活性荧光定量检测试剂盒磷酸化肌细胞增强因子2C抗体
FAHD2A延胡索酰乙酰乙酸水解酶抗体特价促销anti- CYP2S1 antibody细菌β-内酰胺酶报告基因活性荧光定量检测试剂盒磷酸化黑色素瘤细胞粘附分子CD146抗体
FAM101AFAM101A蛋白抗体特价促销anti- CYP2W1 antibody酵母β-内酰胺酶报告基因活性荧光定量检测试剂盒肌细胞增强因子2C抗体
FAM102BFAM102B蛋白抗体特价促销anti- CYP3A4 antibody细胞β-内酰胺酶报告基因活性生物发光法定量检测试剂盒双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶1B抗体
FAM104BFAM104B蛋白抗体特价促销anti- CYP3A5 antibody组织β-内酰胺酶报告基因活性生物发光法定量检测试剂盒磷酸化神经上皮酪氨酸激酶/乳腺癌激酶10抗体
FRMD1FRMD1蛋白抗体特价促销anti- CYP46A1 antibody细菌β-内酰胺酶报告基因活性生物发光法定量检测试剂盒β2微球蛋白抗体
病毒PCR试剂盒Human PPP1R9A ELISA KitAMFR/Gp78/RNF45 环指蛋白45/自分泌运动因子受体抗体三甲胺溶液氨基酸脱羧酶对照
Human PPP1R8 ELISA KitAMBP/Alpha 1 microglobulin α1微球蛋白抗体氯化三(2,2'-联吡啶)钌(II) 六水合物西蒙氏枸橼酸盐
Human PPP3CC ELISA KitA2BP1/Fox1 共济失调蛋白2结合蛋白1抗体氯化三(2,2'-联吡啶)钌(II) 六水合物棉子糖发酵管
Human PPP3R2 ELISA KitRLLM1/C14orf166 胰腺癌转移相关蛋白RLLM1抗体1,1-硫代羰基DI-2(1H)-吡啶甘露醇发酵管
Human PPP2CA ELISA KitABC2/C17orf71 乳腺癌增强蛋白2抗体1,1-硫代羰基DI-2(1H)-吡啶七叶苷
Human PPP2CB ELISA KitCA8 碳酸酐酶相关蛋白8抗体三乙二醇二(对甲苯磺酸酯)5%乳糖发酵管
Human PPP2R1B ELISA KitCACNB1 钙通道电压依赖性β1蛋白抗体三乙二醇二(对甲苯磺酸酯)ONPG
Human PPP2R2A ELISA KitCDK5RAP3 周期素依赖性激酶5激活结合蛋白C53抗体三乙二醇二(对甲苯磺酸酯)V-P半固体琼脂
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。