PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:加利福利亚脑炎病毒PCR检测试剂盒
英文名称:California Encephalitis VirusRTPCR
编号: FSP1436
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
CTNNBL1/Beta catenin like 1β连环蛋白样蛋白1抗体特价促销anti- CENPJ antibodyIL蛋白表达ELISA定量检测试剂盒alpha干扰素诱导蛋白27抗体
DATF1死亡相关转录因子1抗体特价促销anti- CENPL antibody细胞ERK蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒Gamma干扰素诱导蛋白16抗体
TFDP2/DP2转录因子E2F二聚体蛋白2抗体特价促销anti- CENPN antibody载玻片细胞ERK蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒异柠檬酸脱氢酶3 beta亚基抗体
EAF2睾酮调节细胞凋亡诱导和肿瘤抑制基因抗体特价促销anti- CENPO antibody冰冻切片组织ERK蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白1抗体
FLI1尤文肉瘤FLI1蛋白抗体特价促销anti- CENPP antibody石蜡切片组织ERK蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒异柠檬酸脱氢酶gamma亚基抗体
MDMXMDM2样P53蛋白结合抗体特价促销anti- Centrin 1 antibody载玻片细胞ERK蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒Bipped B样蛋白抗体
TMUB1跨膜和泛素样结构域蛋白1抗体特价促销anti- Centrin 2 antibody冰冻切片组织ERK蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒α-L-艾杜糖苷酶抗体
NUP50核孔蛋白50抗体特价促销anti- Centrin 3 antibody石蜡切片组织ERK蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒艾杜糖-2-硫酸酯酶抗体
加利福利亚脑炎病毒PCR检测试剂盒Human SART1 ELISA KitMLCK 肌球蛋白轻链激酶抗体硫酸锶mCPC培养基添加剂
Human SCEL ELISA KitAcetyl-Histone H4(K5) 乙酰化组蛋白H4抗体偏钒酸钠副溶血性弧菌琼脂
Human SART3 ELISA KitAcetyl-Histone H4(K16) 乙酰化组蛋白H4(K16)抗体偏钒酸钠副溶血性弧菌增菌液
Human SAT2 ELISA KitAFP 甲胎蛋白抗体氰酸钠酵母粉葡萄糖氯霉素琼脂(YDC)
Human SAMM50 ELISA KitAEV(Avian Encephalomyelitis virus) 禽脑脊髓炎病毒AEV抗体氰酸钠Candida
Human SASS6 ELISA KitADAM17/CD156b 肿瘤坏死因子α转换酶柠檬酸二氢钠DTM培养基
Human A1BG(Alpha-1B-glycoprotein) ELISA KitPGT/Slco2a1 溶质载体蛋白家族21成员2抗体卡比多巴DRBC琼脂
Human SATB1 ELISA KitADAM10/MADM/CD156c 去整合素样金属蛋白酶10抗体卡比多巴WORT琼脂
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。