过氧化物测试

产品名称 : 过氧化物测试盒 | QuantiChrom™ Peroxide Assay Kit

分类名称 : 氧化应激测定,代谢产物分析

产品说明

过氧化物(如过氧化氢H2O2)是在氧化应激条件下形成的一种重要的活性氧。过氧化物含量高可能与衰老、哮喘、糖尿病、动脉浆样硬化、白内障、关节炎和神经组织退化等疾病有关。

在科研和药物研发中，方便、直接、自动化的过氧化物含量检测手段是最为理想的。本公司研制的过氧化物检测试剂盒可直接用于生物样品的检测，免除了预处理过程。检测原理是利用试剂中的Fe2+ 被样品中的过氧化物氧化为Fe3+，并能与二甲酚橙反应生成紫色复合物的特性，在波长540-610nm(585nm)下检测，其颜色深浅程度与样品中过氧化物的含量成正比。通过配方的改良，充分减小了未处理的样品中其它杂质的干扰。

产品特点

灵敏、准确：检测范围在0.4 – 100 μM (14 – 3400 ng/mL)。

简单、高通量：整个测试过程只需加入一种工作试剂并反应30分钟。利用96孔板高通量检测，每天可以测试上千份样本。

适用范围

1． 检测生物样品(如，血清、血浆、尿液、细胞溶液和培养液)中过氧化物含量。

2．适用于药理学研究，检测药物对过氧化物代谢的影响。

试剂盒规格(96孔板供250份测试)

   试剂A：1 mL              试剂B：50 mL  

   标准品：1 mL 3% 双氧水(H2O2) 

储藏条件：在室温下运输, 4°C下保存, 保质期为六个月。

注意事项：本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。

96孔板检测步骤

样本处理：一些化学成分会干扰检测，在样本准备时要避免接触。这类物质包括：抗坏血酸、乙二胺四乙酸、肝磷脂、二甲基亚砜(>0.02%)，三硝基苯酚(>0.6%)，SDS(>0.12%)，氨基丁三醇(>8mM)和乙醇(>0.4%)。

新鲜的样品可以马上用于检测，或在-20°C下保存，不要反复冻融。如果样品出现颗粒，应离心后取上清进行检测。

试剂准备：检测前所有试剂须放置至室温。每孔需工作试剂100 μL，按试剂A：试剂B = 1：100的比例配制足量工作试剂。

1. 标准品：标准品应在检测前现配。在1.5mL 的离心管中混合10 μL 3%的双氧水和990μL 的水。再取混合后的溶液5μL 与1465μL水混合。最终的双氧水的浓度为30 μM(标注“预混合液”)，按下表比例将其稀释。

2. 将稀释后的标准品和样品各取40 μL，放入透明平底96孔板不同孔中。将200 μL工作试剂加入所有标准品孔和样品孔中。

3. 室温下反应30分钟，在585nm(波长范围540-610nm)处读取吸光度。注：若极少数情况下加入试剂后产生沉淀，可将反应液

转入1.5毫升的离心管，14,000rpm离心2分钟，再小心移取200 mL上清液至一干净孔，读OD值，乘以1.2校正体积因素。

浓度计算

用标准品OD值减去空白对照(水, 8号)OD值，以此值对双氧水浓度作图(见标准曲线)。

样品：用样品(OD值)减去空白对照(OD值)，以此OD差值对照标准曲线，得出样品过氧化物的浓度。

单位换算: 1 μM 双氧水相当于34 ng/mL 或 34 ppb

实验必需品(未提供)

吸液用仪器及附件，96孔板和微孔板分析仪。

96孔板测试标准曲线

论文发表

[1]. Chi Li Yu et al (2008). A novel caffeine dehydrogenase in pseudomonas sp. strain CBB1 oxidizes caffeine to trimethyluric acid. J. Bacteriol. 190(2):772–776.

[2]. Deshmane, S.L. et al (2009). Activation of the oxidative stress pathway by HIV-1 Vpr leads to induction of hypoxia-inducible factor 1alpha expression. J Biol Chem. 284(17):11364-11373. 

[3]. Giao, N.N. et al (2007). Water deficit induced pollen sSterility associated with a programmed cell death and oxidative stress in rice anthers. Proceedings the 2nd International Rice for the Future pp202-209.