嘌呤霉素盐酸盐/嘌呤霉素

嘌呤霉素Puromycin

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说明：嘌呤霉素是一种由链霉菌中获取的氨基核苷抗生素，它能抑制真核和原核生物的核糖体上发生的肽基转移。该抗生素可以作用于革兰氏阳性菌和各种动物、昆虫细胞。真菌和革兰氏阴性菌对其不敏感源于对该抗生素的渗透率较低。但是在一些特别的条件下，嘌呤霉素可作用于大肠杆菌。30多年来，嘌呤霉素作为研究蛋白合成的基本工具被广泛使用。如今，嘌呤霉素盐酸盐更可以用来挑选有该抗生素抑制基因的质粒。嘌呤霉素是一种蛋白质合成抑制剂,它具有与tRNA分子末端类似的结构, 能够同氨基酸结合，代替氨酰化的tRNA同核糖体的A位点结合，并掺入到生长的肽链中。虽然嘌呤霉素能够同A位点结合,但是不能参与随后的任何反应, 因而导致蛋白质合成的终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。
英文名：Puromycin, dihydrochloride (Stylomycin, P638) from Streptomyces alboniger 包装：25mg 类别：生化试剂类
CAS:58-58-2中文名：嘌呤霉素盐酸盐
分子式：C22H31N7O5Cl2
分子量 544.43Purity >98% mp: 168℃-178℃ 吸收波长:275 nm & 267nm
性状：. 溶于水(50mg/ml)银杏提取物,白色或类白色粉末。。
From Sigma
嘌呤霉素的抗性
Pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰基转移酶（PAC），被链霉菌产生的菌株取代。它位于PUR区，
这里连接了其他决定嘌呤霉素生物合成途径的基因。
　　Pac基因的表达阻碍了嘌呤霉素转染哺乳动物细胞表达它。在某些特定条件下，嘌呤霉素
亦可用来挑选大肠杆菌的质粒中携带pac基因的菌株。 
筛选条件
　　嘌呤霉素对大肠杆菌感染性较低，但是在关于哺乳动物细胞的实验中很用。在转染实验中，
它可以替代新霉素系统。 
哺乳动物细胞
　　嘌呤霉素在哺乳动物细胞系反应中的有效浓度范围从1-10μg/ml。实验初始，我们建议，
决定实验中抗生素的最适浓度的方法是首先该浓度可以杀死自身宿主细胞系。
　　嘌呤霉素可以迅速消灭不含有pac基因的真核细胞。死亡细胞从平板分离，该平板可以用于简单和初期的转化克隆细胞鉴定。建议筛选哺乳动物细胞的最适浓度应当低于所列浓度值。 
哺乳动物细胞筛选方法
嘌呤霉素常用浓度范围在1 - 10 μg/ml。等转化出含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉
素的普通培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。
在转染的48小时内，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。
注意：细胞在快速增殖时，抗生素作用最明显。如果细胞浓度过大，抗生素产生的效力也会下
降。细胞在他们融合率不高于25%时分裂。
　　2.每隔3-4天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。
　　3.筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿
　　　主细胞系和转染筛选效率。
　　　4.转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中，用选择培养基培养7天。这次
　　　富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。 
储存条件和稳定性：
　　嘌呤霉素可在室温中运输，收到产品之后应该存放在4℃的环境中。
　　嘌呤霉素在室温条件下可存放3个月，4℃条件下保质期一年。为了达到最理想的稳定状
态和最长的保质期，存放于-20°C环境中，保质期为2年。 
质量控制和溶解方法：
　　HPLC控制，产品纯度大于98%。溶解方法，5-50 mg/mL in dH2O, store at -20℃。 
注意事项：
　　嘌呤霉素是一个有毒化合物，小心拿放。


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