支原体染色试剂盒

       培养细胞中的细菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光学显微镜下可见, 但支原体污染在光学显微镜下不可见, 必须通
过特定的检测方法进行检测。
       鉴别和确定支原体污染, 已知的方法有直接培养法, 支原体特异酶检测, RNA标记法, 放射自显影法, PCR技术以及DNA
荧光染色法。上述检测方法中, 除DNA荧光染色法检测外, 都需要较长的时间以及多种实验设备及试剂支持, 操作步骤
也比较烦琐。
       DNA荧光染色检测法的优点是既灵敏, 又非常快速。有几种DNA荧光染料如DAPI、氮芥喹吖因、二盐酸喹吖因等, 但它
们都不如Hoechst的荧光染色效果好。Hoechst染料的特点是缓慢淬火和最低的本底荧光。
       MP Biomedicals的支原体染色试剂盒(Mycoplasma Stain Kit)用于在培养细胞中原位染色检测支原体或其它原核生物。该试剂盒的原理是DNA荧光染色检测法, 采用的荧光染料为Hoechst 33258。Hoechst染色后在荧光显微镜下观察结果
, 污染的类型可以根据其形态、大小以及其与培养的细胞的相互关系来确定。荧光显微镜下, 支原体是存在于胞质中的大小均一的荧光小点或短棒(丝状物), 而其他污染物的体积则会更大一些并且荧光更亮。

结果
       样本应该在荧光显微镜下以400~1000X油镜镜头观察(激发波长：360nm；发射波长：490~500nm)。通过阳性和阴性对照玻片与结果的比较, 可以很容易的辨认出支原体。

未污染培养
       在未被污染的培养物中只有细胞核被染色, 偶尔会出现从死细胞或破损细胞中释放的呈球形的微核或其他的核碎片,它们与支原体相比, 体积更大并且荧光更亮。

污染的培养
       被污染的培养中可以观察到细胞核被许多荧光小亮点包围着, 他们的直径普遍在0.1~0.3μm之间并且具有多形性, 形态可以从球形一直到细丝状。