Anti-AKT1抗体

别名: AKT;CWS6;PKB:PKB-ALPHA:PRKBARACRAC-ALPHA
应用: WB IHCIF
稀释比例: WB 1500-2000. IHC 1:50-100. IF 1:50-100.
蛋白分子量: 56kDa
Gene ID: 207
保存: Store at -20°C. Avoid freeze 1 thaw cycles.
储存液: Bufr. PBS with 0.02% sodium azide, 50% glycerol, pH73.
纯化方法Afnity purification
亚型: IgG
免疫原: A synthetic peptide of human AKT1
性状:液体
Public Immunogen Range: A syntthetic peptide of human AKT1
Subellular Locations: Cell membrane Cytoplasm Nucleus
Swiss Prot: P31749
克隆类型: Polyclonal Antibody
注意事项:
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和，但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过24小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意 有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴-次性手套操作
操作步骤:
根据使用量,取每1mL RIPA加入10uL PMSF,使PMSF的zui终浓度为1mM。混匀备用(PMSF现用现加)
1、样品前处理:
a)对于贴壁细胞:去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗-遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接虫。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
2、后处理:
将裂解后的样品1000-14000g 离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。
温馨提示:
工作液与浓缩液选择的技巧，以及各自的优势。
1,工作液的优势:工作液操作方便，降低实验操作步骤，对于要求无菌的实验，降低染菌风
金。
2,浓缩液的优势:浓缩液成本相对较低，实验范围更广，对于不要求无菌的实验，可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高,保存更加稳定。