小鼠瘦素(LEP/Leptin)ELISA试剂盒

LEP/Leptin

用途 ：
小鼠瘦素(LEP/Leptin)ELISA试剂盒仅供科研使用，定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中大肠杆菌宿主残留蛋白LEP/Leptin的含量。 
原理: 
采用竞争法测定大肠杆菌宿主残留蛋白LEP/Leptin水平。用大肠杆菌宿主残留蛋白LEP/Leptin抗原包被微孔板，制成固相载体，实验 时依次在微孔板中加入标本及标准品，并加入 HRP 标记的LEP/Leptin抗体，标本及标准品中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与 固相抗原结合。反复洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化为蓝色，再用硫酸终止反应，转变成黄色。 
标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，颜色越浅。颜色的深浅和样品中的LEP/Leptin含量呈负相关。采用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度（OD 值），根据标准曲线，计算测试样品中LEP/Leptin浓度。

以下是产品参数规格：

试剂盒规格：96T/48T 
试剂盒说明书：48孔配置一份/96孔配置一份
种属:人、大鼠、小鼠、兔、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等,多年专业酶免服务，质量保证，产品仅用于科研免费提供代测服务。
标本要求 ：
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
1）标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2）加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3）温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 
4）配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6）加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 
7）温育：操作同3。
8）洗涤：产品仅用于科研操作同5。
9）显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10）终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11）测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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试剂盒组成及试剂配制 ：
1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。 
2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶
4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 
9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 
10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。