"C8166细胞:人T淋巴细胞白血病细胞系
细胞背景资料:T淋巴细胞白血病;HTLV-1转化
细胞形态:淋巴母细胞样
细胞生长:悬浮
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性:悬浮
培养细胞的冻存及复苏:细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中,储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。【冻存细胞】1)选对数增生期细胞(证明无支原体污染),在冻存前1d换液;2)按常规方法把培养细胞制备成悬液,计数,使细胞密度达5×10/ml左右密度,离心,去上清;3)加入配制好的冻存液(培养液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂10%二甲基亚砜(DMSO)或甘油,可使冰点降低,使细胞内水分在冻结前透出细胞外;4)分装于无菌冻存管中,每管加1.5m悬液;5)旋好冻存管并仔细检查,一定要盖紧,做好标记;6)冻存:在特殊的仪器或简易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min时间内,下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度,过快能影响细胞内水分透出,太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套,以免液氮冻伤。【复苏细胞】1)从罐中取出冻存管;2)迅速放入36℃~37℃水浴,不时摇动,使其急速融化,30~60s内完成;3)冻存管用70%酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10ml培养液;4)低速离心(500~1000r/min) 5min,去上清后再用培养液洗一次;5)用培养液适当稀释后,装入培养瓶37℃培养,次日更换一次培养液后,继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分,密度应达到10/ml,在融后稀释20倍时,仍能保持5×10/ml数量。
我们都知道世界宇宙浩瀚无极,除了我们知道的地球、太阳、月球、银河系以外还有好多其他宇宙行星,这样的世界对于很多人来说很陌生稀奇甚至无法想象,这样的世界同样也是我们无法触摸的,然而还有一个微观的世界也是我们无法接触的,这个就是——细胞里的微观世界。对于很多人来说,除了从书本上简单了解植物细胞的知识以外,在行业外人的意识里,细胞还是一个让人一头雾水的词语,甚至都是一个无形的存在,更别提描述和看见这个东西,但是对于行业内的生物科学研究者和医学研究者,这是个经常被运用到的必需之物,用宇宙世界的包含于被包含的关系把细胞的微观世界剖析开来,让我们了解到细胞是什么样的东西及应用和未来世界细胞在生命中的重要作用。细胞发炎——心脏疾病;DNA受损——癌症;细胞能量衰退——肾功能衰竭、关节炎、帕金森氏;老化蛋白堆积——糖尿病、痴呆症、心脑血管疾病;所有的衰老和疾病都是机体内细胞开的损伤、衰老和死亡造成的。所以细胞在科学研究和医学研究中有着重要的应用作用,尤其是原代细胞,它是从机体组织中分离提取培养,它可以作为一种科研材料帮助研究者进行项目研究和课题研究,也可以帮助医学者进行疾病研究和疾病试验,试想从人体组织中分离培养的细胞经过医学药物的试验再运用到人体身上,无论从功效还是结果上效果都是。
细胞培养过程中相关问题总结:悬浮性细胞应如何继代处理?一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,可将培养角瓶口端稍微抬高,直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶,加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?欲回收动物细胞,其离心速率一般为300xg(约1,000rpm),5-10分钟,过高之转速,将造成细胞死亡;细胞之接种密度为何?依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因;细胞冷冻培养基之成份为何?动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意:由于DMSO稀释时会放出大量热能,故不可将DMSO直接加入细胞液中,必须使用前先行配制完成;DMSO之等级和无菌过滤之方式为何?冷冻保存使用之DMSO等级,必须为Tissue culture grade之DMSO,其本身即为无菌状况,次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于4°C,避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质,并可减少污染之机会。若要过滤DMSO,则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜;冷冻保存细胞之方法?冷冻保存方法一:冷冻管置于4°C 30~60分钟→ (-20°C 30分钟)→-80°C 16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下,再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20°C不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中,惟存活率稍微降低一些;细胞欲冷冻保存时,细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?冷冻管内细胞数目一般为1x10(6)cells/ml vial,融合瘤细胞则以5x10(6)cells/ml vial为宜;应如何避免细胞污染?细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之方法;如果细胞发生微生物污染时,应如何处理?直接灭菌后丢弃之。
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