"NCI-H929细胞:人浆细胞白血病细胞系
细胞背景资料:详见相关文献介绍
细胞形态:淋巴母细胞样
细胞生长:悬浮
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:保持细胞密度在5×105—1×106 cells/ml之间,每周换液2—3次
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性:悬浮生长
细胞传代注意事项:①传代培养时注意无菌操作并防止细胞间的交叉污染。所有操作尽量靠近酒精灯火焰。每次只进行一种细胞的操作。每种细胞使用一套器材;②每天观察细胞形态,掌握好细胞是否健康的标准:健康细胞的形态饱满,折光性好,生长致密时即可传代;③如发现细胞有污染迹象,应立即采取措施,一般应弃置污染的细胞,如果必须挽救,可加含有抗生素的BBS或培养基反复清洗,随后培养基中加入较大量的抗生素,并经常更换培养基。传代细胞的建系和维持:细胞系的维持通过换液传代再换液、再传代和细胞种子冻存来实现。对每一个细胞系来说都有其自身的特点,要做好建系的维持必须记录好细胞档案,换液传代和做好细胞系的管理工作。培养细胞的冻存及复苏:细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中,储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。
细胞组成了组织,组织组成了器官,器官的组织就形成了一个个体,所有的组织和器官都是由细胞分化增殖形成的,通过汲取营养物质,最后形成个体。把人体的单个小细胞比喻成一个地球,人体组织呢就是一个太阳系,器官就是银河系,这样生动形象的比喻,可以让我们很容易了解到细胞与组织、组织与器官之间的关系。人的身体就像一个庞大的机器工厂,每时每秒都在进行着能量的传输与转化,它也像个巨大的产业链,一旦某个环节出了问题,同样伴随着的是人的身体也会出现不同程度的功能障碍,这也就是为什么人到某一定阶段以后身体的某些功能会逐渐衰退的原因。人的基本生命活动是通过细胞实现的,细胞的活动或功能异常,人体就容易生病。人之所以会得病就是人体内的细胞除了问题,一旦细胞有问题——组织就有问题——器官就有问题——系统就有问题——人就会得病。人体细胞每天都在分裂增殖,但是增长到一定阶段后就开始停止、病变或凋亡,如果不及时修复或增加,人体就会出现不同程度的疾病症状,小到病毒感冒,大到疑难杂症无一不都是因为人体内的细胞出了问题。
细胞消化过程总结:其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可,吸去胰酶后,残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞(绝大部分1min不到)。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞,连续这样传代,对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去,胰酶润洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了,一般你肉眼观察贴壁细胞层,只要能移动了,多半呈沙壮移动,其实已经可以了,很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞,这是没有必要的。一般能移动了,说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了,细胞之间的附着也已经消失了,细胞已经独立分布了(虽然没有呈现很广的离散分布)。这个时候应该停止消化,不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好,间隙很大,才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液,之后在贴壁的过程中仍然会聚集,这个是贴壁培养的细胞,尤其是肿瘤细胞的一个特性,无论死活的细胞都是如此,你可以尝试,准备100%的单个细胞悬液,贴壁后观察细胞,仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此,容易聚集,不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液(不要笑,这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误,以为悬浮培养就是一个一个分开)。细胞只要能从基质上脱离下来,这个时候即使是成片的(比如Calu-3细胞),吹打不超过20次后(一般10次即可),成小规模聚集(10个细胞左右),是正常的,不要试图再去延长消化时间,或者像有的同学那样吹打1h,等待单细胞悬液出现。比较难消化的细胞(润洗方法5min还不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足够了,一般我加300ul。即使这样难消化的细胞,一般不超过5min,即可见细胞成片移动,就应该停止消化。一些正常细胞也会有难消化的时候,比如tsDC细胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙状移动。
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