"KG-1细胞:急性髓系细胞白血病细胞系
细胞背景资料:详见相关文献介绍
细胞形态:淋巴母细胞样
细胞生长:悬浮
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:1:3传代,2-3天传一代
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性:悬浮生长
细胞培养无菌操作的演示:凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面;靠近酒精灯火焰操作。器皿使用前必须过火灭菌,继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染。玻璃器械洗消:一、新的玻璃器皿的洗消:自来水刷洗,除去灰尘。烘干、泡:烤箱中烘干,然后再浸入5%稀中12小时以除去脏物、铅、等物。刷洗、烘干:12小时后立即用自来水冲洗,再用洗涤剂刷洗,自来水冲干净后用烤箱烘干;泡酸、清洗:用清洁液浸泡12小时,然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次,最后蒸馏水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。烘干、包装:洗干净后先烘干,然后用牛皮纸(油光纸)包装。高压消毒:包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子,打开开关和安全阀,当蒸气成直线上升时,关闭安全阀,当指针指向15磅时,维持20-30分钟。高压消毒后烘干。二、旧的玻璃器皿的洗消:刷洗、烘干:使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中,泡过来苏尔溶液(洗涤剂)的器皿要用清水刷洗干净,然后烘干。泡酸、清洗:烘干后泡入清洁液(酸液),12小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗(避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗),再用蒸馏水冲洗3次。烘干、包装:洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸(油光纸)等包装。
公司细胞库冻存并保种有2300多种各类细胞系。针对每种不同的细胞系,公司摸索并积累了大量细胞培养条件和优化参数,为您的细胞实验保驾护航。细胞培养是生命科学研究中最基础、也是最常用的实验手段。从冻存→复苏→传代→实验,在每一次细胞培养的过程中我们都是精心呵护,小心培养,心里都是默默承诺:我要护你一世周全!可是可是……无数次细胞都因污染而离我而去,投入的不只是我们貌美如花的青春,还有那一去不复返的经费!在细胞生物学,生物化学,免疫学,神经生物学,病理学……只要涉及细胞的研究领域,都面临着支原体污染的威胁。在众多污染物中,也就属支原体最狡猾了,他最善于隐藏自己,因为被支原体污染的细胞不会马上死亡,但会改变细胞的新陈代谢,甚至会改变细胞的基因表达谱,我们就这样被欺骗了无数次,谁让我们就是个看“颜值”的花痴了。可是我们通过被虐了几百次的经验中总结出来,当你的细胞出现了这些症状时:生长速率改变;活性减弱;形态改变;染色体畸变;转染效率显著降低;细胞复苏后存活率降低……。那你就得千万小心了,也许你的细胞已经被支原体欺凌了!
细胞冻存基本方法:1.细胞:选对数生长期细胞,收集细胞24小时前换液一次。2.计数:按常规方法把细胞制成细胞悬液,计数,令细胞密度达5×10(6)/ml,离心去上清,吸入离心管中。3.冻存液:先用培养液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO冻存液,按上法一滴滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。4.分装:分装入无菌安剖中,每安剖加1.5毫升细胞悬液。5.封口:用塑料安剖时拧紧瓶口即可;如用火焰封闭安剖口后,仔细检查,定要封严,必要时可浸入蓝色液中观察,为安全起见,把安剖缝入纱布小袋中,以防液氮浸入后,融解时因受热发生爆炸伤人;纱袋一端系以线绳,末端扎有小牌,注明:细胞名称,冻存日期,以便日后查找。细胞株(系)的使用,为医学研究和测试工作带来了极大的方便。但细胞的传代是有限制的,长期连续传代的细胞,不仅消耗大量的人力和物力,而且细胞的生长与形态等会有一定退变或转化,因而细胞失去原有的遗传特性,有时还会由于细胞污染而造成传代中断,种子丢失。因此,在实际工作中常需冻存一定数量的细胞,以备替换使用。细胞冷冻与复苏是细胞培养 室的常规工作和通用技术。
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