D407细胞：人视网膜色素上皮细胞系

"D407细胞：人视网膜色素上皮细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２传代
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁生长
如何进行细胞复苏：１)从液氮容器中取出冻存管，直接浸入３７℃温水中，并不时摇动令其尽快融化；２)从３７℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加１０倍以上培养液，混匀；３)离心，１０００rpm，５min；４)弃去上清液，加入含１０%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，３７℃培养箱静置培养；５)次日更换一次培养液，继续培养。【温馨提醒】１)从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但为对数生长期细胞。在冻存前一天换一次培养液；２)将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作(戴棉手套)，以免冻伤；３)冻存和复苏用新配制的培养液。细胞复苏的时候，有些初次实验员将冻存管从液氮中取出后，放在室温下，经常发生冻存管爆炸，该怎么避免出现这种情况吗？其中在拧紧冻存管的时候是否有哪些细节要注意的？一般常用的方法是取出冻存管后在超净工作台中用酒精棉球擦试管口，再稍拧松盖子，再放３７度水浴锅中摇溶，在将细胞转移到装有３７度预热过的培养基的试管中，迅速离心，再用培养基洗一遍。
细胞培养无菌操作步骤和注意事项：１.打开无菌工作台及净化室的紫外灯，消毒半小时以上。２.进入净化室前先关闭紫外灯，打开超净台风机，等待３０min以上，以排尽臭氧。３.穿好隔离衣，戴好口罩，帽子。４.风淋２分钟。５.０.１%水泡手，擦干。６.点燃酒精灯;超净台内应避免放入过多的物品;使用的吸管，滴管，试管，培养瓶等均事先灭菌。７.打开各类瓶盖前先过火，以固定灰尘;打开的瓶口、试管口过火焰，镊子使用前应经火焰烧灼。８.水平式风机的超净台，应使瓶口斜置，应尽量避免瓶口敞开直立。９.同一根吸管或滴管不应连续用于几个不同的细胞系；吸取培养基的吸管应离开培养瓶或试管口０.５cm，避免伸入培养瓶口或试管口；以防止细胞系的互相混杂污染。１０.漏在培养瓶上或台上的液体，立即用酒精棉球擦净。１１.操作完毕后恢复工作台面。
细胞培养中支原体污染的经验分享：支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在０.３-０.５um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞，也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长，营养要求比细菌高。细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。在细胞培养中支原体感染发生率达到６３%，支原体感染发生后能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达，又不能通过可视法对其进行检测，而且它对细胞的生长率影响较小，不易引起注意。国内外研究表明，９５%以上是以下四种支原体：口腔支原体(M.orale)、精酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)，为牛源性。以上是最常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染;严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体最突出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如万古霉素等完全不敏感；对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体最有抑制活性及常用于支原体感染治疗的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些喹诺酮;其他类抗生素如基糖苷类、霉素对支原体有较小抑制作用，所以常不用来作为支原体感染的化学治疗剂。
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