抗体制备过程:
1.材料与试剂
a.提取的动物 Ig
b.弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂
c.青霉素和链霉素
d.实验动物 兔
e.其它材料及试剂
2、选择实验活体。
3、进行动物免疫实验。
4、试取血样进行测试,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,杀死实验活体,采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。胎牛血清(无菌采制)
参数规格:
产品应用 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
(石蜡切片需做抗原修复)
英文名称 Anti-BK channel
中文名称 钙激活钾通道蛋白 α 1抗体
别 名 Maxi Potassium channel alpha; bA205K10.1; BK channel; BKCa channels; BKCA alpha; BKCA alpha subunit; BKTM; Calcium activated potassium channel subfamily M subunit alpha 1; Calcium activated potassium channel subunit alpha 1; DKFZp686K1437; Drosophila slowpoke like; hSlo; K(VCA)alpha; KCa1.1; KCNMA 1; KCNMA; KCNMA1; Large conductance calcium activated potassium channel subfamily M alpha member 1; Maxi K; Maxi K channel; MaxiK; Potassium large conductance calcium activated channel subfamily M alpha member 1; SAKCA; Slo 1; SLO alpha; SLO; Slo homolog; Slo1; Slowpoke homolog; Stretch activated Kca channel; KCMA1_HUMAN.
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep
产品类型 一抗
研究领域 神经生物学 信号转导 通道蛋白
蛋白分子量 predicted molecular weight: 137kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human BK channel (1120-1165aa)
亚 型 IgG
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
抗体的制备过程:
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
抗体分子标记技术:
(一)原理
当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
(二)准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体;0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5;无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5);胺T反应终止缓冲液;
2.仪器
凝胶过滤柱;¥-记数器;玻璃纤维滤。
(三)操作要点
1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行;
2.如果氧化反应损伤蛋白质,可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m,并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年;
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天);
5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
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肌球蛋白重链6(MYH6)ELISA Kit for Myosin Heavy Chain 6, Cardiac Muscle, Alpha (MYH6)规格:48T/96T
G蛋白偶联受体78(GPR78)ELISA Kit for G Protein Coupled Receptor 78 (GPR78)规格:48T/96T
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核连蛋白1(NUCB1)ELISA Kit for Nucleobindin 1 (NUCB1)规格:48T/96T
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B淋巴细胞特异性激活OCT结合蛋白1抗体8-Prenylnaringenin中文名:8-异戊烯基柚皮素别名:分子式:C20H20O5
核糖体合成蛋白BOP1抗体Auriculasin中文名:别名:分子式:C25H24O6
调节中心体分离早期相关激酶BORA抗体8-Demethylsideroxylin中文名:别名:分子式:C17H14O5
莱姆病螺旋体抗体Syzalterin中文名:别名:6,8-Dimethylapigenin分子式:C17H14O5
钙激活钾通道蛋白 α 1抗体 Aeromonas sobria种属:Aeromonas sobria
分离基物:鱼
提供形式:冻干粉
安全等级:1
模式菌株:yes
培养方法
培养基:营养肉汁琼脂:牛肉膏 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,琼脂 15.0g,蒸馏水 1.0L,pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O,则有利于产生芽孢。pH7.0。121℃,15min。
生长条件:30℃,好氧温和气单胞菌