EC-GI-10细胞：人食管鳞状细胞癌细胞系

"EC-GI-10细胞：人食管鳞状细胞癌细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：１)解冻过程中细胞裂解，推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为１*１０(６)至１*１０(７)细胞/毫升；２)解冻过程中的问题，推荐的解决方案：在-７０℃至-８０℃下保存冷冻的培养物，保存时间为１-５天，但这不是保存的方法。在３７℃充分解冻后应立即开始培养；３)对冷冻液过敏，推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在２４小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的条件在对数期；４)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄，推荐的解决方案：解冻最近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
悬浮细胞不容易转染：悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍，所以，脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。其次，脂质体试剂的毒性较大，这就使得悬浮细胞的转染更为困难了。另外，悬浮细胞不易培养，易死亡，也给细胞转染造成了一定的困难。为了提高悬浮细胞的转染效率，可以使用非脂质体的转染试剂，如纳米材料的。也可以使用电转染方法，针对悬浮细胞等难转染细胞还是挺不错的，电击对细胞有一定的损伤，选用具有细胞膜修复功能的电转染试剂，可以将电击对细胞的伤害降到最低，悬浮细胞不易转染，选对试剂及良好的细胞培养环境才是关键。
其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在３７度一般不到２min足够消化细胞(绝大部分１min不到)。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后３７度消化；什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了(虽然没有呈现很广的离散分布)。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞都是如此，你可以尝试，准备１００%的单个细胞悬液，贴壁后观察细胞，仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此，容易聚集，不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液(不要笑，这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误，以为悬浮培养就是一个一个分开)。细胞只要能从基质上脱离下来，这个时候即使是成片的(比如Calu-３细胞)，吹打不超过２０次后(一般１０次即可)，成小规模聚集(１０个细胞左右)，是正常的，不要试图再去延长消化时间，或者像有的同学那样吹打１h，等待单细胞悬液出现。
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