SiHa细胞：人子宫颈鳞状细胞癌细胞系

"SiHa细胞：人子宫颈鳞状细胞癌细胞系
细胞背景资料：该细胞来源于一位日本病人的手术切除的肿瘤组织。电镜下可以看到细胞间典型的桥粒和细胞质中大量的张力丝。１９７５年发现有支原体污染，而后被去除。该细胞整合有HPV１６基因组，每个细胞中有１~２个拷贝。
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：３传代，２-３天换液一次
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁生长
养了几年细胞，说一点自己培养细胞方面的看法：１)培养细胞前，可以看看细胞特点说明书，包括细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等；２)不同细胞生长周期不同，有的生长很快，比如说MDA-MB-２３１，传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了，有的又是特别慢，等的人心焦，BT４７４就是，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满，所以就要在培养细胞的过程中多多摸索了；３)对于娇弱的细胞，就得细心呵护了，胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要注意转速和时间，每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况；４)冻存细胞复苏后第二天更换一次培养基；５)培养箱隔一段时间彻底用酒精棉擦洗一次；６)养细胞的教训：不能偷懒!细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋。１)不管买的细胞、惠赠的细胞，刚拿到手赶紧做两件事：检测是否有支原体污染; 迅速扩增冻存；２)发现有污染迅速处理掉，特别是当你养了很多种细胞时; 细菌污染，真菌污染很容易发现，支原体污染的话，细胞会长的慢，买个支原体检测的kit定期检测一下；３)传代细胞日常的值日清洁是必须的，此外还要定期熏蒸；４)细胞的传代一定要规律，保持相同的confluency和传代时间间隔，不要随心所欲或者拖延；５)注意个人卫生。
悬浮细胞不容易转染：悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍，所以，脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。其次，脂质体试剂的毒性较大，这就使得悬浮细胞的转染更为困难了。另外，悬浮细胞不易培养，易死亡，也给细胞转染造成了一定的困难。为了提高悬浮细胞的转染效率，可以使用非脂质体的转染试剂，如纳米材料的。也可以使用电转染方法，针对悬浮细胞等难转染细胞还是挺不错的，电击对细胞有一定的损伤，选用具有细胞膜修复功能的电转染试剂，可以将电击对细胞的伤害降到最低，悬浮细胞不易转染，选对试剂及良好的细胞培养环境才是关键。
【胰蛋白酶消化操作】１)加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗(冲洗)，加入适量消化液(胰蛋白酶液)，注意消化液的量以盖住细胞，消化温度是３７℃；２)显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度；(３)吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。【吹打分散细胞操作】１)吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液；２)吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入１０ml离心管中；３)平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以１０００转/分钟离心６-８分钟；４)弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入２ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。【分装稀释细胞操作】１)显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于５×１０５/ml。最后要做好标记；２)分装：将细胞悬液吸出分装至２～３个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖；３)继续培养：用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO２培养箱中继续培养。传代细胞２小时后开始贴附在瓶壁上。
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