Caki-2细胞：人肾透明细胞癌细胞系

"Caki-2细胞：人肾透明细胞癌细胞系
细胞背景资料：该细胞源自一位６９岁白人男性的初期肾腺癌组织
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：３—１：６传代，每周换液２—３次
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁生长
解冻细胞出现大量细胞碎片的可能原因及推荐解决方案如下：１)冷冻时细胞密度过低：推荐的解决方案：缩短解冻过程中的时间。将细胞取出后，立即将冻存管浸入在３７℃的水浴中，并震荡至全部融化，然后迅速地转移到预热的培养基中；２)不适当的冷冻过程：推荐的解决方案：解冻不同冷冻室总的试管。确保在冻存过程中采用的适当的技术，并确保使用了适量和适合的冷冻液。出现生长缓慢的可能原因及推荐解决方案如下：１)培养瓶的大小：一般解决方案是一些细胞在培养基中倾向于维持一定的密度。将培养物转移到较小的培养瓶中，使细胞密度上升；如，根据培养基的体积，从T７５培养瓶转移到２或３个T２５培养瓶中；２)细胞密度过低：通常解决方案是提高未来冷冻物种细胞的冻存密度，或使用较小的培养容器，或解冻多个试管来进行培养。
细胞培养时分布不均匀，通常操作步骤：做细胞生物学实验，细胞铺板大概是我们最常见的一个实验。但有时候铺得不是很均匀：要么中间密周围稀，要么周围密中间秃顶。下面为大家分享几点经验。尽量消化细胞分散成单细胞悬液。对于易于消化的细胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶润洗一遍（25cm2培养瓶或6孔板），弃掉胰酶，37度消化2-3分钟或室温消化5min左右，镜下观察是否细胞消化较为分散。如果不够，延长消化时间。96孔板一般以100微升每孔接种，直接用100微升移液器吸取细胞悬液，沿孔壁（稍离开一点孔底即可，不要离底太高）直接接入，移液器不需完全打到，轻轻按下即可，每铺完一行换一次枪头同时轻轻混匀细胞悬液。都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘，注意把握力度（我一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆，将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩余三个边，静置约5分钟，放入37度培养箱。6孔板、12孔板或24孔板，可采用将每个孔加入少量无血清培养基，晃动浸润整个孔底，然后用移液枪吸至第二孔，同样方法浸润孔底，其它孔依此类推，这样整个孔底都是湿润的，细胞悬液会平铺在整个孔底，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢，但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式，但力度没有96孔板好掌握，效果没有96孔板好。培养瓶里面加好细胞以后(比如传代好/分好细胞以后)，先顺时针摇晃3次，马上逆时针摇晃3次。然后延X轴Y轴分别水平摇动3次。放入CO2培养箱后,平放着培养瓶重复延X轴Y轴分别水平摇动3次。
其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在３７度一般不到２min足够消化细胞(绝大部分１min不到)。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后３７度消化；什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了(虽然没有呈现很广的离散分布)。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞都是如此，你可以尝试，准备１００%的单个细胞悬液，贴壁后观察细胞，仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此，容易聚集，不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液(不要笑，这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误，以为悬浮培养就是一个一个分开)。细胞只要能从基质上脱离下来，这个时候即使是成片的(比如Calu-３细胞)，吹打不超过２０次后(一般１０次即可)，成小规模聚集(１０个细胞左右)，是正常的，不要试图再去延长消化时间，或者像有的同学那样吹打１h，等待单细胞悬液出现。
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