SNU-387细胞：人肝癌细胞系

"SNU-387细胞：人肝癌细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２传代
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁生长
细胞接收操作说明：请仔细阅读本操作说明及相应的细胞说明书。本公司细胞发货有四种形式：T２５培养瓶(一般是贴壁细胞使用，悬浮细胞也可以)、离心管(悬浮细胞使用多，当然，有些公司也会用这种离心管形式发贴壁细胞，但是，长期经验来说，贴壁细胞容易发生形态变化，估计是细胞培养空间狭小，血清不足导致(最主要是怕运输延误导致这些情况发生)，个人不建议用离心管形式发贴壁细胞)及干冰(冻存细胞用，主要是冬天天气冷，温度低于４℃的地方，都要考虑冻存细胞)。T２５培养瓶：是用T２５细胞培养瓶直接发货的形式。收到细胞后，拆开包装T２５培养瓶的自封袋，不拆封口膜，表面喷７５%酒精消毒后显微镜观察细胞状态(有条件可以拍下此时细胞照片)。将细胞放入３７度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。首先将T２５中培养基取出装好备用，如细胞密度高于８０%，可以直接消化传代，相反则加入５-６ml培养基放回培养箱继续培养即可。离心管：是用１５ml离心管发货的形式，只用于悬浮细胞发货。收到细胞后消毒处理及将细胞放入３７度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。首先将T２５中培养基取出装好备用(如果实验室没有T２５培养瓶，可以暂时T７５培养瓶，加入１０-１５ml培养基，建议１０ml培养基，也可以使用T１７５培养瓶，加入５０-６０ml培养基，培养瓶越大，需要的培养基越多。当然如果刚接收到细胞密度不够的话，不用大瓶子，先用小瓶子养起来再换大的，不然会长得很慢，严重的，会导致细胞死亡等危险)，平衡完成后，离心(１０００rpm，３min)收集细胞，弃上清，用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中，放回培养箱继续培养。干冰：是用本公司冻存液冻存细胞后，直接用干冰将冻存的细胞冷冻发货的形式。收到细胞后按照细胞复苏的步骤操作即可。
传代的操作步骤注意事项：1)操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。2)点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。3)操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。4)不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。5)瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。6)吸溶液的吸管等不能混用。贴壁细胞传代的操作步骤：1)吸除培养瓶内旧培养液。2)向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。3)置温箱中2-5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。4)吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液冲洗，直接加入培养液。5)用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。6)计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。悬浮细胞传代的操作步骤：1)吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000rpm5分钟。2)吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。
其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在３７度一般不到２min足够消化细胞(绝大部分１min不到)。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后３７度消化；什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了(虽然没有呈现很广的离散分布)。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞都是如此，你可以尝试，准备１００%的单个细胞悬液，贴壁后观察细胞，仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此，容易聚集，不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液(不要笑，这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误，以为悬浮培养就是一个一个分开)。细胞只要能从基质上脱离下来，这个时候即使是成片的(比如Calu-３细胞)，吹打不超过２０次后(一般１０次即可)，成小规模聚集(１０个细胞左右)，是正常的，不要试图再去延长消化时间，或者像有的同学那样吹打１h，等待单细胞悬液出现。
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