SNU-423细胞：人肝癌细胞系

"SNU-423细胞：人肝癌细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２传代
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁生长
【细胞培养中细菌、霉菌的污染情况总结】细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理；霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，３７度孵箱培养２-３天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用酸铜溶液擦拭CO２孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。CO２孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用擦洗孵箱(包括隔板，箱壁)。并把放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁(２月左右)，尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是：用８４液擦洗－清水擦洗－７５%酒精擦洗－紫外灯照。预防霉菌污染，可在培养基里加３u/ml的两性霉素或制霉菌素或D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作。
细胞培养过程中的“六要”“三不要”“三勤”：有的人认为细胞培养很难，经常一不留神就把细胞污染了，牢记细胞培养中的六“要”三“不要”三“勤”让你成功培养出你想要的细胞！六“要”：1、拿到新细胞的时候要做好支原体检测，不管是买的细胞、惠赠的细胞，并迅速扩增冻存。2、离开细胞房的时候要给细胞房照紫外，超净台要用完就开紫外。3、离开过操作台的东西再进入操作台之前一定要用酒精喷一遍，包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。4、培养基的话最多不要超过2天就要换一次。细胞可以不传代，但是培养基是一定要换的。5、发现有污染要迅速处理掉，特别是同时养了很多种细胞; 细菌污染、真菌污染很容易发现（这两种污染绝对是环境中带来的，多注意一下卫生条件是可以杜绝的），支原体污染的话，细胞会长的慢，若是珍贵的细胞可以买个支原体清除剂杀一杀，还是可以挽救的。6、冻存细胞复苏后第二天要更换一次培养基。三“不要”：1、不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。2、不要怕浪费，枪头什么的只要有可能污染就换，如果用酒精灯就什么都稍微烤一下。3、身体的各个部分不要接触不需要接触的地方。比如实验台，又比如培养箱内部。三“勤”：1、勤换水，水浴锅很脏，细胞培养箱要是得手动加湿的话，盘里的水也会很脏。那种公用的水浴锅、培养箱，定期换水习惯不好的，交叉污染严重的，那就可以选择一些绿色、安全、无刺激性的除菌剂，改善一下，免得细胞遇到污染时措手不及。2、勤擦洗，培养箱隔一段时间彻底用安全除菌剂擦洗一次，有人用酒精擦洗，但毕竟究竟只能除掉细菌，对于真菌是没有办法杀死的，所以这里推荐大家选用效果和口碑都不错的除菌剂处理。3、勤清洁，细胞房日常的值日清洁是必须的，此外还要定期熏蒸。养细胞就像打仗，知彼知己，百战不殆。做到以上几点，细胞培养易如反掌，导师再也不用担心我的细胞养死了。
【悬浮型细胞的传代操作】１)吸出细胞培养液，放入离心管中，离心１０００rpm ５分钟；２)吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。【注意事项】１)严格的无菌操作；２)适度消化：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。附：EDTA(０.０２％四乙酸二钠)消化液配方：EDTA ０.２０g，NaCl ８.００g，KCl ０.２０g，KH２PO４ ０.０２g，葡萄糖 ２.００g，０.５％红４ml，加入蒸馏水定容至１０００ml。１０磅２０min高压灭菌，使用时调节PH值到７.４。注意EDTA不能被血清中和，使用后培养瓶要彻底清洗，否则再培养时细胞容易脱壁。
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