EM-3 人髓系白血病细胞系

"EM-3 人髓系白血病细胞系
细胞背景资料：髓系白血病；女性 
细胞形态：淋巴母细胞样 
细胞传代培养的胰酶消化法：传代培养：是指细胞从一个培养瓶以１：２或１：２以上的比例转移，接种到另一培养瓶的培养。传代细胞，可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代，部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。实验步骤：①入无菌室之前用肥皂洗手，再用７５% 的酒精擦拭消毒双手；②倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液３７℃下预热；③超净台台面应整洁，用７５%酒精棉球擦拭清洁；④打开超净工作台的紫外灯照射台面２０min左右，关闭紫外灯，打开风机清洁空气除去臭氧；⑤点燃酒精灯;取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内；⑥将培养用液瓶口用７５%酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上；⑦倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用２-３ml Hanks液洗去残留的就培养基，或用少量胰酶涮洗一下；⑧每个大培养瓶加入１ml胰酶，小培养瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察。当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中；⑨加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(７-１０ml/大瓶;３-５ml/小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。盖好瓶盖，适度拧紧后稍回转，以利于CO２的进入，将培养瓶放回CO２培养箱；⑩对悬浮培养细胞，步骤７-９不做。直接将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。 
细胞生长：悬浮 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
EM-3 人髓系白血病细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不好的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞，如果细胞形态不好，（或者细胞形态不清晰，表面似有异物等）可以在传代的时候进行如下操作：首先，倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞建议只吹打，不消化）其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。通常称之为“二传”。如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞上乘形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：悬浮 
EM-3 人髓系白血病细胞系
因为细胞生长的时候肯定是要相互联系，大部分的细胞都是要成片生长的，尤其是对于贴壁细胞，单个细胞贴壁之后长着长着就长到一片去了。但是如果是成片的细胞抱团的话，传代后细胞是不能贴壁的，这样抱团的细胞就会死亡。所以，消化传代的时候一定要将细胞消化成单个单个的独立状态，这个啊是非常考究你的功夫的！细胞一旦脱落入悬液里你很难再将他吹打成单个，因为他没有受力点了。很难找到受力点让你对他吹打的力分散开细胞。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，受力点就是细胞贴壁的地方。这样你就必须要严格控制好消化的程度啊，这和大师做饭掌握好火候是一样的道理啊。既要消化到容易吹打下来，又不能太过，一吹就整片脱落，要单个单个地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是为了保证不同生长状态贴壁程度的细胞能够都维持在好的受力点分散开。这个是很重要的一点。尤其是对于某些细胞这一点就是他活去死的致命点。像Caco-２细胞就是如此。另外关于传代很重要一点就是一定不能等到细胞长满的时候才去消化传代。要在细胞长到７０%左右的时候就要传代了，一旦发现细胞生长中已经有叠层生长的时候就要立即进行消化传代。不能再拖了。关于换液传代时候洗瓶的问题。对于用DMEM培养基培养的细胞，你在洗的时候如果是用无血清１６４０去洗细胞在随即后的几次中会比用DMEM洗的长的要好。同样，用１６４０培养的也有这个现象。如果不嫌麻烦的话，可以用PBS来洗，洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的，对于有些细胞会更胜一筹。洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清，防止它对胰酶的影响。这样能够保证胰酶的消化能力优先，是很关键的一点。先补充这么多，还会后续更新。再补充一点：传代时PBS洗是很重要的一步，最近发现，用PBS就可以把细胞消化开来。加入PBS放置１０-１５分钟，有些需要更长的时间，等到细胞一个个分离开来的时候，就可以直接吹打下来，但是和胰酶消化一样，要控制好时间，不能时间太过了，要不然损伤细胞，细胞不容易成活，状态容易不好。这个方法对于某些细胞是很管用的。有些细胞用胰酶消化不容易消化成单个的时候，或者临时没有胰酶了，可以选用此方法。不过一定要试试，看是否适合你的细胞。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
KYSE0410细胞系相关产品：H929细胞、GTL-16细胞、SKG-IIIa细胞 
TCCPAN2细胞系相关产品：HLEC细胞、QGP-1细胞、OP9细胞 
LX-2细胞系相关产品：MDA-MB-435S细胞、OVCA433_Bast细胞、GM04678细胞 
293 c18细胞系相关产品：NCI-SNU-668细胞、HPAF-I细胞、A431/P细胞 
OVISE细胞系相关产品：HCC1954BL细胞、H2087细胞、HM细胞 
I90细胞系相关产品：MES 13细胞、SW1463细胞、INS-1细胞 
SKNBE(2c)细胞系相关产品：Melan-a细胞、HCA 7细胞、NCI-H522细胞 
SuDHL 10细胞系相关产品：Madin-Darby Canine Kidney细胞、CATHa细胞、SK-MEL 28细胞 
H-676B细胞系相关产品：MHCCLM3细胞、MN-9D细胞、NT2-D1细胞 
HCCC9810细胞系相关产品：Hs 840.T细胞、MEL细胞、Human Lung Microvascular Endothelial Cell line-5a细胞 
Caov-4细胞系相关产品：IR983F细胞、Cor L51细胞、SW13细胞 
K1735细胞系相关产品：C3H 10T1/2细胞、Hs 742.T细胞、LI7细胞 
CHP-100细胞系相关产品：PC9细胞、CAL-33细胞、HPDE6c7细胞 
Me Wo细胞系相关产品：MDAMB453细胞、SUM 159PT细胞、SW 1417细胞 
TR146细胞系相关产品：NK-92 transfected with MFG-hIL2细胞、T98 G细胞、TF-1细胞 
WILL-2细胞系相关产品：Baby Hamster Kidney from litter No. 21细胞、BMF细胞、NCIH2172细胞 
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Vero C1008细胞系相关产品：COLO 206F细胞、SU 86.86细胞、TW01细胞 
HPAEC细胞系相关产品：Vero细胞、FBHE细胞、SK-SH-SY5Y细胞 
HepG2-luc细胞系相关产品：SKNO1细胞、TE 671细胞、NRK clone 49F细胞 
EM-3 人髓系白血病细胞系
CAL 12T细胞系相关产品：HOS-TE85细胞、SW-1990细胞、MES-SA/Dx-5细胞 
NCI-HUT-520细胞系相关产品：P3J HR-1细胞、RS(4;11)细胞、MF2059细胞 
SACC-83细胞系相关产品：LM-TK-细胞、SGC996细胞、HCC-38细胞 
SMA560细胞系相关产品：Kit 225 K6细胞、CEM/0细胞、PECAPJ34细胞 
Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5细胞系相关产品：H-676B细胞、Centre Antoine Lacassagne-148细胞、RIN-m 14B细胞 
RPMI1846细胞系相关产品：KYSE50细胞、RSC-96细胞、HASMC细胞 
Menschliche Und Tierische Zellkulture-1细胞系相关产品：NCIH1838细胞、H157细胞、SK 1细胞 
SKNBE细胞系相关产品：PZ-HPV-7细胞、L-132细胞、H-446细胞 
Centre Antoine Lacassagne-51细胞系相关产品：LWnt-3A细胞、HT 1197.T细胞、SRA01/04细胞 
VP 229细胞系相关产品：COLO-680N细胞、BTI-Tn-5B1-4细胞、UM-UC3细胞 
CEM-C1细胞系相关产品：Reuber H35细胞、AG06814-J细胞、Hs 729细胞 
N1E115细胞系相关产品：ST-2细胞、Calu-6细胞、Kit225 K6细胞 
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GM03569细胞系相关产品：UCLA NPA-87-1细胞、NCIH3255细胞、BV2细胞 
NCIH647细胞系相关产品：Kit 225-K6细胞、Tca-83细胞、CX1细胞 
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COLO.205细胞系相关产品：PC3细胞、RCM1细胞、NCI-1155细胞 
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JB6 [Mouse]细胞系相关产品：NRK49F细胞、CL1-5细胞、ST-2细胞 
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95D细胞系相关产品：OCUM-1细胞、C4-2细胞、NTHY-ORI3.1细胞 
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NK10a细胞系相关产品：HuTu 80细胞、UMUC14细胞、SN12PM6细胞 
KU-19-19细胞系相关产品：MM1.S细胞、SK-NEP-1细胞、HT细胞 
CTLL(2)细胞系相关产品：KU-19-19细胞、SLMT-1细胞、MC9细胞 
PLCPRF5细胞系相关产品：SCL-II细胞、QBC939细胞、L929(NCTC)细胞 
HECV细胞系相关产品：CCD 19Lu细胞、NCTC 3960细胞、PANC-28细胞 
MuM-2B细胞系相关产品：MNNG细胞、KYSE 70细胞、CL34细胞 
HuP-T3细胞系相关产品：SK-CO-1细胞、SMMC-7721细胞、HCT-116细胞 
BEL7404细胞系相关产品：Detroit562细胞、LNCaP FGC细胞、SACC83细胞 
NCI-H865细胞系相关产品：SU-DHL-6细胞、AZ-521细胞、SU-DHL-2细胞 
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Strain L-929细胞系相关产品：LED-WiDr细胞、H1915细胞、MT-4细胞 
IPLB-SF 21AE细胞系相关产品：SKO3细胞、Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2细胞、HCC-2108细胞 
EM-3 人髓系白血病细胞系
P 815细胞系相关产品：SPCA1细胞、SNU354细胞、EU-3细胞 
MC3T3-E1 Subclone 24细胞系相关产品：H1666_DA细胞、526mel细胞、Lung cancer-1/squamous细胞 
DR2R1610细胞系相关产品：253J细胞、50.B1细胞、Tregs细胞 
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HCC-1419细胞系相关产品：Adeno 293细胞、MCFs细胞、INS-1E细胞 
MNNG/HOS Clone F-5细胞系相关产品：SJSA1细胞、DHL-16细胞、GM02131A细胞 
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H1734细胞系相关产品：H-250细胞、211H细胞、BE2C细胞 
SW-962细胞系相关产品：H2126细胞、Jiyoye (P-2003)细胞、CFPAC1细胞 
SW1463细胞系相关产品：H69细胞、NCI-H2030细胞、H-711细胞 
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LX-2细胞系相关产品：MDA-MB-435S细胞、EAhy926细胞、Ramos.G6.C10细胞 
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