WEHI-3 小鼠白血病细胞系

"WEHI-3 小鼠白血病细胞系
细胞背景资料：白血病；BALB/c 
细胞形态：淋巴母细胞样 
细胞培养无菌操作的演示：凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用７５％酒精擦拭瓶子的外表面；靠近酒精灯火焰操作。器皿使用前必须过火灭菌，继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处，使用时仍要过火。各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：自来水刷洗，除去灰尘。烘干、泡：烤箱中烘干，然后再浸入５％稀中１２小时以除去脏物、铅、等物。刷洗、烘干：１２小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干；泡酸、清洗：用清洁液浸泡１２小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗１５次，最后蒸馏水冲洗３-５次和用双蒸水过３次。烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸(油光纸)包装。高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向１５磅时，维持２０-３０分钟。高压消毒后烘干。二、旧的玻璃器皿的洗消：刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液(洗涤剂)的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液(酸液)，１２小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗(避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗)，再用蒸馏水冲洗３次。烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸(油光纸)等包装。 
细胞生长：悬浮 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
WEHI-3 小鼠白血病细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可。吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足够消化细胞。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37℃消化。比较难消化的细胞（润洗方法5min还不能消化），这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育。不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性。如果和标准形态不一致，那可能是自己没消化好导致的，但如果消化方法正确，仍然成片分布，甚至完全吹打成单细胞悬液，贴壁后仍然成片分布，这是细胞的特性，是因为贴壁过程中重新聚集了。这个时候你拼了命要去让它均匀分布，你的细胞之后会对你越来越不好。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：悬浮 
WEHI-3 小鼠白血病细胞系
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
Namalva细胞系相关产品：Nakata-1细胞、FF-WT-BJ细胞、Tca-83细胞 
D283 Med细胞系相关产品：253JB-V细胞、L 428细胞、BC3H1细胞 
H-2591细胞系相关产品：HTori-3细胞、A549细胞、CCRF CEM细胞 
KU19-19细胞系相关产品：LTEPa2细胞、GalK1细胞、PLB-985细胞 
MIA-PaCa-2细胞系相关产品：Dakiki细胞、HSC3细胞、HCPEpiC细胞 
J-774细胞系相关产品：IMR 90细胞、A9细胞、Rat-1细胞 
M210B4细胞系相关产品：BT-20细胞、NCIH358细胞、H-920细胞 
KU-812细胞系相关产品：PC14细胞、2008细胞、NKT细胞 
CAL 120细胞系相关产品：CV-1.K细胞、D562细胞、MRC9细胞 
OE-19细胞系相关产品：Nthy-ori 3.1细胞、CTLA4Ig-24细胞、JM-1细胞 
MBMEC细胞系相关产品：CNLMG-B5537SKIN细胞、alphaTC1 Clone 6细胞、UPCI:SCC90细胞 
NCI N87细胞系相关产品：MGC-803细胞、MV4-11细胞、NCIH208细胞 
Vero 76 clone E6细胞系相关产品：EFO 27细胞、HMCB细胞、PaTu-8988s细胞 
KG-1a细胞系相关产品：HVSMC细胞、ROS17/28细胞、QG-56细胞 
PTK 1细胞系相关产品：Medical Research Council cell strain-9细胞、SKRC-42细胞、SHI-1细胞 
H-650细胞系相关产品：LCLC103H细胞、ARO 81-1细胞、AtT 20细胞 
U 266细胞系相关产品：SUDHL-4细胞、AML-EOL-1细胞、HCS-2/8细胞 
MiaPaca.2细胞系相关产品：MGHU1细胞、L-428细胞、MDA-MB-330细胞 
U-343MG细胞系相关产品：NCI-SNU-601细胞、SW480E细胞、DB细胞 
OVCA420细胞系相关产品：H 9细胞、MGH-U1细胞、CEM-CCRF细胞 
WEHI-3 小鼠白血病细胞系
ME180细胞系相关产品：PNT1-a细胞、L78细胞、Fetal Human Colon细胞 
Hs 578Bst细胞系相关产品：HCC1171细胞、Tu686细胞、J82细胞 
NTERA2-D1细胞系相关产品：TGBC11TKB细胞、H378细胞、BT-549细胞 
MC3T3, E1 subgroup-4 clone细胞系相关产品：Ketr-3细胞、HAPI细胞、C-6细胞 
KASUMI6细胞系相关产品：NCIH1435细胞、OCI/AML-3细胞、RMG1细胞 
GM02132细胞系相关产品：SNU-620细胞、VMM5A细胞、A549ATCC细胞 
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MOPC细胞系相关产品：HS-294细胞、GM3570细胞、C57 Mouse Tumor 64细胞 
C12细胞系相关产品：DLM8细胞、TE13细胞、RPMI-8226细胞 
KYSE0520细胞系相关产品：Caki-1细胞、RM-1细胞、S16细胞 
CD-18细胞系相关产品：B16 melanoma F10细胞、NCIH1573细胞、RAEC细胞 
NT-2细胞系相关产品：CATH.a细胞、CT 26细胞、3T3-L1细胞 
U118-MG细胞系相关产品：SV-HUC细胞、brain-derived Endothelial cells.3细胞、GH 3细胞 
MKN-74细胞系相关产品：RMS 1598细胞、IHHA-1细胞、alpha-TC1-6细胞 
Hs 870.T细胞系相关产品：RPVSMC细胞、MRC5细胞、KYSE510细胞 
Mouse Forestomach Carcinoma细胞系相关产品：MCA 205细胞、GM00346B细胞、Capan-1细胞 
EC-GI-10细胞系相关产品：KYSE-180细胞、NOR10细胞、P31FUJ细胞 
SNU182细胞系相关产品：U266细胞、CC-LP-1细胞、hTERT-RPE1细胞 
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BAC1.2F5细胞系相关产品：LAD-2细胞、HBVP细胞、VB细胞 
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T8细胞系相关产品：Lu-65细胞、SK-SH-SY5Y细胞、RCC23细胞 
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NUGC2细胞系相关产品：SuDHL 1细胞、GM05887A细胞、P3/X63/Ag8.653细胞 
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