Karpas-299 人间变性大细胞淋巴瘤细胞系

"Karpas-299 人间变性大细胞淋巴瘤细胞系
细胞背景资料：间变性大细胞淋巴瘤；男性 
细胞形态：淋巴母细胞样 
培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-１９６℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。【冻存细胞】１)选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前１d换液；２)按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达５×１０／ml左右密度，离心，去上清；３)加入配制好的冻存液(培养液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂１０％二甲基亚砜(DMSO)或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外；４)分装于无菌冻存管中，每管加１.５m悬液；５)旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做好标记；６)冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min时间内，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。【复苏细胞】１)从罐中取出冻存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不时摇动，使其急速融化，３０～６０s内完成；３)冻存管用７０％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加１０ml培养液；４)低速离心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培养液洗一次；５)用培养液适当稀释后，装入培养瓶３７℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分，密度应达到１０／ml，在融后稀释２０倍时，仍能保持５×１０／ml数量。 
细胞生长：悬浮 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
Karpas-299 人间变性大细胞淋巴瘤细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
公司细胞库冻存并保种有2300多种各类细胞系。针对每种不同的细胞系，公司摸索并积累了大量细胞培养条件和优化参数，为您的细胞实验保驾护航。细胞培养是生命科学研究中最基础、也是最常用的实验手段。从冻存→复苏→传代→实验，在每一次细胞培养的过程中我们都是精心呵护，小心培养，心里都是默默承诺：我要护你一世周全！可是可是……无数次细胞都因污染而离我而去，投入的不只是我们貌美如花的青春，还有那一去不复返的经费！在细胞生物学，生物化学，免疫学，神经生物学，病理学……只要涉及细胞的研究领域，都面临着支原体污染的威胁。在众多污染物中，也就属支原体最狡猾了，他最善于隐藏自己，因为被支原体污染的细胞不会马上死亡，但会改变细胞的新陈代谢，甚至会改变细胞的基因表达谱，我们就这样被欺骗了无数次，谁让我们就是个看“颜值”的花痴了。可是我们通过被虐了几百次的经验中总结出来，当你的细胞出现了这些症状时：生长速率改变；活性减弱；形态改变；染色体畸变；转染效率显著降低；细胞复苏后存活率降低……。那你就得千万小心了，也许你的细胞已经被支原体欺凌了！ 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：悬浮 
Karpas-299 人间变性大细胞淋巴瘤细胞系
细胞消化过程总结：其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在３７度一般不到２min足够消化细胞（绝大部分１min不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后３７度消化。２，什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞都是如此，你可以尝试，准备１００%的单个细胞悬液，贴壁后观察细胞，仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此，容易聚集，不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液（不要笑，这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误，以为悬浮培养就是一个一个分开）。细胞只要能从基质上脱离下来，这个时候即使是成片的（比如Calu-３细胞），吹打不超过２０次后（一般１０次即可），成小规模聚集（１０个细胞左右），是正常的，不要试图再去延长消化时间，或者像有的同学那样吹打１h，等待单细胞悬液出现。比较难消化的细胞（润洗方法５min还不能消化），比如HCT１５, LS４１１和KM１２，这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般１００mm dish，一次最多加入５００ul，就足够了，一般我加３００ul。即使这样难消化的细胞，一般不超过５min，即可见细胞成片移动，就应该停止消化。一些正常细胞也会有难消化的时候，比如tsDC细胞，但也只要用少量胰酶孵育，３min左右即可看到成片沙状移动。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
L-M(TK-)细胞系相关产品：GB-1细胞、BALB/3T3细胞、KMM1细胞 
IEC6细胞系相关产品：HEK 293-EBNA细胞、COR-L23细胞、ME-180细胞 
OVCA420细胞系相关产品：H 9细胞、MGH-U1细胞、CEM-CCRF细胞 
SF-763细胞系相关产品：CCRF SB细胞、RH8994细胞、L cell line细胞 
University of Michigan-Urothelial Carcinoma-3细胞系相关产品：HCC366细胞、CG4细胞、COLO-680N细胞 
MGH-U3细胞系相关产品：RC-K8细胞、AR4-2J细胞、PANC1005细胞 
Jurkat-E6细胞系相关产品：Baby Hamster Kidney-21细胞、WM-451Lu细胞、NIH 3T6细胞 
HEL细胞系相关产品：OSA细胞、MPP 89细胞、MDAMB175VII细胞 
KMM-1细胞系相关产品：MCF12F细胞、RPMI 2650细胞、CCRFCEM细胞 
QGP1细胞系相关产品：NCI-H220细胞、MT-2J细胞、LS-180细胞 
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MDA-361细胞系相关产品：MCF7-CTRL细胞、C-28/I2细胞、MFE-280细胞 
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Karpas-299 人间变性大细胞淋巴瘤细胞系
JB 6细胞系相关产品：H1417细胞、16-HBE细胞、FC33细胞 
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