U266B1 人外周淋巴细胞系

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细胞背景资料：详见相关文献介绍 
细胞形态：淋巴母细胞样 
细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升高到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。 
细胞生长：悬浮 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
U266B1 人外周淋巴细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不好的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞，如果细胞形态不好，（或者细胞形态不清晰，表面似有异物等）可以在传代的时候进行如下操作：首先，倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞建议只吹打，不消化）其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。通常称之为“二传”。如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞上乘形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。 
细胞传代方法：１：３传代,２-３天传一代 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：悬浮生长  
U266B1 人外周淋巴细胞系
细胞培养相关问题总结：冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入３７°C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在１分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂；细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有１０-１５ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题；可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活；可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活；培养细胞时应使用５%或１０%CO２？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO３-/CO３２-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO３的含量将决定细胞培养时应使用的CO２浓度。当培养基中NaHCO３含量为每公升３.７g时，细胞培养时应使用１０%CO２；当培养基中NaHCO３为每公升１.５g时，则应使用５%CO２培养细胞。何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。培养基中是否须添加抗生素？除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。 
细胞形态特性：淋巴母细胞样 
Adeno 293细胞系相关产品：COLO-824细胞、Hep-G2/C3A细胞、HCAEC细胞 
COLO 394细胞系相关产品：HRPEpiC细胞、NPC-TW-039细胞、MHCC 97-L细胞 
CL MC/9细胞系相关产品：HFL 1细胞、Walker256-TC细胞、NOR-10细胞 
PCI-4B细胞系相关产品：GDM-1细胞、NUGC4细胞、HUT125细胞 
MCM细胞系相关产品：P-36细胞、C3H 10T1/2细胞、MFE280细胞 
AAV-293细胞系相关产品：P19细胞、A1847细胞、HECV细胞 
CCRF.CEM细胞系相关产品：OCIAML2细胞、SUDHL-16细胞、Hs 688(A).T细胞 
SR-786细胞系相关产品：OCI/AML-4细胞、EFM-192B细胞、SK-RC-52细胞 
OCI Ly3细胞系相关产品：Tokyo Medical and Dental university 8细胞、MDAMB436细胞、CESS细胞 
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SNU668细胞系相关产品：Malme-3M细胞、H-446细胞、DU 4475细胞 
HCT116/L细胞系相关产品：PANC 1005细胞、LAC细胞、U-2-OS细胞 
MDA-MB 361细胞系相关产品：Roswell Park Memorial Institute 6666细胞、HUASMC细胞、SF-126细胞 
OUMS-23细胞系相关产品：210RCY3-Ag1.2.3细胞、SF 763细胞、COLO206F细胞 
ARPE-19细胞系相关产品：CoCL3细胞、TMK-1细胞、MDA 1386细胞 
IPEC-J2细胞系相关产品：NT2细胞、Det. 562细胞、ACC-M细胞 
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MDA-MB 361细胞系相关产品：Roswell Park Memorial Institute 6666细胞、HUASMC细胞、SF-126细胞 
Hs 739.T细胞系相关产品：U138-MG细胞、HUVSMC细胞、OVCA 432细胞 
3T3-J2细胞系相关产品：Potorous tridactylus Kidney 1细胞、C-127细胞、VK2细胞 
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H-522细胞系相关产品：HEK-293-F细胞、HTR8/SVneo细胞、H-1703细胞 
HD-LM-2细胞系相关产品：EOC 20细胞、GM04679细胞、FU-MMT-1细胞 
NCIH378细胞系相关产品：COLO320-DM细胞、COS-7细胞、EC9706细胞 
COLO-829细胞系相关产品：A-10细胞、SW48细胞、CA 46细胞 
HSC/mHSC细胞系相关产品：Human Embryonic Kidney 293细胞、Danio rerio Gill细胞、hESC细胞 
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KTCTL-140细胞系相关产品：C518细胞、COLO 684细胞、H-1954细胞 
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GL261细胞系相关产品：GM02131细胞、SK-N-MC细胞、HuH-1细胞 
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Caco2-BBE细胞系相关产品：Hs729细胞、OCI-AML5细胞、Embryonic Bovine Tracheal cells细胞 
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C57/B6-L细胞系相关产品：Hs611T细胞、CCD-112CoN细胞、P3 88 D1细胞 
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Biopsy xenograft of Pancreatic Carcinoma line-3细胞系相关产品：FU-97细胞、OCM-1细胞、WM-451Lu细胞 
A-427细胞系相关产品：D407细胞、Centre Antoine Lacassagne-62细胞、SL-1细胞 
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L-6细胞系相关产品：L02细胞、ATN-1细胞、HOS-143B细胞 
BNL-CL.2细胞系相关产品：NW-MEL-38细胞、HSF细胞、P31-FUJ细胞 
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hFOB 1.19细胞系相关产品：HTR8细胞、MiaPaCa2细胞、THP-1(ATCC)细胞 
NCI-H920细胞系相关产品：HLEC-B3细胞、Gingival carcinoma Neck Metastasis细胞、CORL279细胞 
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B16-F0细胞系相关产品：Hs737T细胞、RK 13细胞、H1155细胞 
CL MC/9细胞系相关产品：HFL 1细胞、NK92细胞、UCLA-SO-M20细胞 
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