KMST-6 人胚成纤维细胞系

"KMST-6 人胚成纤维细胞系
细胞背景资料：胚成纤维细胞；女性 
细胞形态：成纤维细胞样 
细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升高到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
KMST-6 人胚成纤维细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气的，大家争取做到因材施教，比如试试下面的“四步消化法”。（以难消化细胞为例），具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍（目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉）。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况把握）。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁 
KMST-6 人胚成纤维细胞系
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
HSC（Human Schwann）细胞系相关产品：CCC-HHM-2细胞、SupB15W细胞、GM17219细胞 
RC92A细胞系相关产品：NCIH1648细胞、CCC-HEH-2细胞、HUT 125细胞 
L929(NCTC)细胞系相关产品：C-26细胞、GP-293细胞、AHH1细胞 
Med 341细胞系相关产品：373MG细胞、HG2855细胞、U-87 MG细胞 
NCTC929细胞系相关产品：OAW-42细胞、GM07404细胞、SK-N-BE(1)n细胞 
JCA1细胞系相关产品：NCI-Hut 125细胞、Sp2/O细胞、H-64细胞 
Colon 26细胞系相关产品：Jiyoye (P-2003)细胞、Ramos细胞、MHCC97细胞 
Panc02细胞系相关产品：P815细胞、KTA-7细胞、CHOS细胞 
Hs-940细胞系相关产品：UCLA RO-81-A-1细胞、SK-Hep1细胞、751-NA-15细胞 
Transformed Human Liver Epithelial-2细胞系相关产品：OKT3细胞、MOLM-13细胞、RAW264细胞 
Hs-688A-T细胞系相关产品：LNCaP.FGC细胞、ANA1细胞、HTR-8/SV-neo细胞 
H-716细胞系相关产品：CHL-IU细胞、KYSE140细胞、MGH-U3细胞 
SUP-B1细胞系相关产品：RPMI 7951细胞、Hep-G2细胞、SKLMS1细胞 
MSCs（mUCMSCs）细胞系相关产品：NCIH64细胞、NIH:OVCAR4细胞、MD Anderson-Metastatic Breast-231细胞 
COLO-320DM细胞系相关产品：NCI-H510A细胞、L-cell细胞、PK-15细胞 
QGP1细胞系相关产品：NCI-H220细胞、MT-2J细胞、LS-180细胞 
QGP1细胞系相关产品：NCI-H220细胞、MT-2J细胞、LS-180细胞 
SVHUC细胞系相关产品：H-2052细胞、Factor Dependent Cell-Paterson 1细胞、NCI-H716细胞 
Namalwa细胞系相关产品：A 253细胞、CV-1 in Origin Simian-7细胞、Mc Ardle 7777细胞 
FRhK4细胞系相关产品：NCIH508细胞、CCLP-1细胞、Tn 5B1-4细胞 
KMST-6 人胚成纤维细胞系
LN299细胞系相关产品：Rat1细胞、ROS 17/28细胞、EB-1细胞 
Hs 578.Bst细胞系相关产品：H-2107细胞、MPC-5细胞、HL-60细胞 
CCRFCEM细胞系相关产品：MM-1S细胞、SR786细胞、HTori:3细胞 
HuO9细胞系相关产品：SW1990细胞、MDA-436细胞、BT.549细胞 
FUOV1细胞系相关产品：COLO320 DM细胞、MonoMac 6细胞、MNNGHOS细胞 
SK N SH细胞系相关产品：MDCC MSB1细胞、Hopkins-92细胞、H-1341细胞 
COLO-1细胞系相关产品：Hs 766T细胞、OACP4 C细胞、Hs-675-T细胞 
SUPB-15细胞系相关产品：CCD-841-CoN细胞、HCT-8细胞、NCI-H446细胞 
HEMCSS细胞系相关产品：STTG1细胞、SKCO 1细胞、RL95细胞 
Kit225-K6细胞系相关产品：NCI-H358细胞、Okayama University Medical School-27细胞、HeLa.S3细胞 
H295R-S1细胞系相关产品：AU565细胞、AN3-CA细胞、HEK-2细胞 
NCI.H226细胞系相关产品：HEC1-B细胞、5-8F细胞、NCI H508细胞 
RKO_AS45细胞系相关产品：NCL-H548细胞、X63-Ag8.653细胞、Saos2细胞 
LC2/Ad细胞系相关产品：RCM1细胞、McG-1细胞、Hep II细胞 
SNU1040细胞系相关产品：16HBE14o-细胞、PLA-801D细胞、RSC 96细胞 
HUT-226细胞系相关产品：RCC23细胞、COLO-699细胞、OVCAR10细胞 
U-343-MG细胞系相关产品：OUMS-27细胞、CMT 93细胞、H1568细胞 
SW-1783细胞系相关产品：FRhK4细胞、CHOK1细胞、U14细胞 
NKM1细胞系相关产品：ECC 10细胞、RD-2细胞、766T细胞 
L-6 myoblast细胞系相关产品：P30-OHKUBO细胞、SKCO-1细胞、TALL-104细胞 
MKN-7细胞系相关产品：KM12 SM细胞、108CC15细胞、NR-8383细胞 
Walker256细胞系相关产品：NCI-H1993细胞、kms 11细胞、624mel细胞 
HTR8svn细胞系相关产品：HCC-9204细胞、Panc3_27细胞、HT-144细胞 
MCA 205细胞系相关产品：SW 1417细胞、Vero-E6细胞、SCL1细胞 
E.L.4细胞系相关产品：HEL9217细胞、HEL299细胞、SVHUC细胞 
GS-9L细胞系相关产品：BC-028细胞、Neukoplast细胞、OAW42细胞 
TGW细胞系相关产品：Clone Y-1细胞、ARO细胞、RCC-JF细胞 
FLC-7细胞系相关产品：B16 F10细胞、B95-8细胞、Menschliche Und Tierische Zellkulture-1细胞 
SK LU 1细胞系相关产品：EMT6细胞、LA-N-6(OAN)细胞、NCIH1836细胞 
HCV 29细胞系相关产品：Ly19细胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5细胞、OSRC2细胞 
SK LU 1细胞系相关产品：EMT6细胞、LA-N-6(OAN)细胞、NCIH1836细胞 
CCFSTTG1细胞系相关产品：CORL105细胞、HSAEC1-KT细胞、HCC2279细胞 
HUC-1细胞系相关产品：NCI-H187细胞、Astrocyte type I clone细胞、TE-12细胞 
NCI-H1666细胞系相关产品：Mouse Bladder Tumor line-2细胞、MDA-MB-435 S细胞、GM02131细胞 
CII细胞系相关产品：MLFC细胞、bEnd3细胞、HEL92.1.7细胞 
Tsup-1细胞系相关产品：CCFSTTG1细胞、58F细胞、HCC-1954BL细胞 
Tsup-1细胞系相关产品：CCFSTTG1细胞、58F细胞、HCC-1954BL细胞 
SNG-M细胞系相关产品：SKMEL5细胞、OVCA432细胞、CCC-HIE-2细胞 
NCI-H841细胞系相关产品：BNL.1ME A.7R.1细胞、NOZAWA细胞、Colo16细胞 
Centre Antoine Lacassagne-78细胞系相关产品：H-548细胞、LNT-229细胞、NTERA2-cloneD1细胞 
HCT 116细胞系相关产品：H1694细胞、MOLT-16细胞、Metastatic Variant-522细胞 
KMST-6 人胚成纤维细胞系
HCC202细胞系相关产品：NKM1细胞、WEHI 164 TC细胞、SUDHL16细胞 
Homo sapiens No. 578, breast cells细胞系相关产品：TMK-1细胞、Ramos.2G6.4C10细胞、COLO 206F细胞 
DMS53细胞系相关产品：Ca-Ski细胞、L428细胞、H1836细胞 
Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2细胞系相关产品：B10BR细胞、C-33A细胞、HuH 6细胞 
Lilly Laboratories Cell-Monkey Kidney 2细胞系相关产品：NFHIOSE-29细胞、A 2058细胞、H-2347细胞 
hTERT-HME1细胞系相关产品：A-673细胞、COLO 320 HSR细胞、NL-20细胞 
NOMO1细胞系相关产品：Keio University-19-19细胞、Evsa T细胞、Kit 225 K6细胞 
Vero 76细胞系相关产品：SK-N-BE(1)细胞、HM细胞、PG-4 S+L-细胞 
HEMCSS细胞系相关产品：STTG1细胞、SKCO 1细胞、RL95细胞 
Tb 1-Lu细胞系相关产品：BNL-HCC细胞、SF767细胞、CV-1 in Origin Simian-1细胞 
HSC-3细胞系相关产品：NCIH2081细胞、NCI-SNU-5细胞、RT-BM细胞 
L929(NCTC)细胞系相关产品：C-26细胞、JROECL 21细胞、MESSADX5细胞 
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