HES [Human embryonic skin fibroblast] 人皮肤成纤维细胞系

"HES [Human embryonic skin fibroblast] 人皮肤成纤维细胞系
细胞背景资料：皮肤；成纤维细胞 
细胞形态：成纤维细胞样 
细胞培养无菌操作的演示：凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用７５％酒精擦拭瓶子的外表面；靠近酒精灯火焰操作。器皿使用前必须过火灭菌，继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处，使用时仍要过火。各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：自来水刷洗，除去灰尘。烘干、泡：烤箱中烘干，然后再浸入５％稀中１２小时以除去脏物、铅、等物。刷洗、烘干：１２小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干；泡酸、清洗：用清洁液浸泡１２小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗１５次，最后蒸馏水冲洗３-５次和用双蒸水过３次。烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸(油光纸)包装。高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向１５磅时，维持２０-３０分钟。高压消毒后烘干。二、旧的玻璃器皿的洗消：刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液(洗涤剂)的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液(酸液)，１２小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗(避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗)，再用蒸馏水冲洗３次。烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸(油光纸)等包装。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
HES [Human embryonic skin fibroblast] 人皮肤成纤维细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气的，大家争取做到因材施教，比如试试下面的“四步消化法”。（以难消化细胞为例），具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍（目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉）。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况把握）。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁 
HES [Human embryonic skin fibroblast] 人皮肤成纤维细胞系
细胞冻存基本方法：１．细胞：选对数生长期细胞，收集细胞２４小时前换液一次。２．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达５×１０(６)/ml，离心去上清，吸入离心管中。３．冻存液：先用培养液９分＋DMSO １分（或甘油）配成１０％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。４．分装：分装入无菌安剖中，每安剖加１.５毫升细胞悬液。５．封口：用塑料安剖时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安剖口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，为安全起见，把安剖缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，融解时因受热发生爆炸伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小牌，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找。细胞株(系)的使用，为医学研究和测试工作带来了极大的方便。但细胞的传代是有限制的，长期连续传代的细胞，不仅消耗大量的人力和物力，而且细胞的生长与形态等会有一定退变或转化，因而细胞失去原有的遗传特性，有时还会由于细胞污染而造成传代中断，种子丢失。因此，在实际工作中常需冻存一定数量的细胞，以备替换使用。细胞冷冻与复苏是细胞培养 室的常规工作和通用技术。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
SUDHL-1细胞系相关产品：NCI-SNU-119细胞、JIMT-1细胞、COS1细胞 
D407 RPE细胞系相关产品：NCI H508细胞、SuDHL 10细胞、GM05384细胞 
hs 68细胞系相关产品：MSB1细胞、MOLP-2细胞、RBL2H3细胞 
J.E6-1细胞系相关产品：JROECL 33细胞、SU86_86细胞、18G3.cl 1细胞 
MLA 144细胞系相关产品：ATDC-5细胞、CAL 51细胞、NCI-H1650细胞 
Karpas-299细胞系相关产品：HCM细胞、SHIN-3细胞、Rat Lung Epithelial-6-T-antigen Negative细胞 
LC-2/ad细胞系相关产品：TE-85 clone 5细胞、SDBMSC细胞、AG 9细胞 
MUTZ-1细胞系相关产品：SKM1细胞、HEK293-EBNA细胞、HIT-T15细胞 
EAC-E2G8细胞系相关产品：OVCAR3细胞、TM-3细胞、A9 (Hamprecht)细胞 
NBL-2细胞系相关产品：NPC-039细胞、Farage Original Line细胞、EFM192B细胞 
Large Cell Lung Cancer-103H细胞系相关产品：WPMY-1细胞、A2780CP细胞、NCI-SNU-423细胞 
L(TK-)细胞系相关产品：MC57G细胞、SUNE-1细胞、RKO-AS-45-1细胞 
DSL-6A/C1细胞系相关产品：OVCAR-420细胞、MDA175细胞、A427细胞 
NG10815细胞系相关产品：P30-OHK细胞、B78细胞、IOSE-80细胞 
L-02细胞系相关产品：H4IIE细胞、H-2330细胞、ECC 12细胞 
NCI747细胞系相关产品：N87细胞、KYSE0520细胞、NCI-H735细胞 
NCI747细胞系相关产品：N87细胞、KYSE0520细胞、NCI-H735细胞 
SKRC 39细胞系相关产品：JM1细胞、HOCF细胞、NCI H69细胞 
HBMEC细胞系相关产品：LNCaP clone FGC细胞、U-266 AR1细胞、LS-174T细胞 
TSUpr1细胞系相关产品：SNU761细胞、UCLA NPA871细胞、KG1细胞 
HES [Human embryonic skin fibroblast] 人皮肤成纤维细胞系
MCF-10A细胞系相关产品：NALM6细胞、Human Embryo Kidney-2细胞、MCF7-CTRL细胞 
Hs 840.T细胞系相关产品：SUIT-2细胞、HCC-2279细胞、Human Liver-7702细胞 
OCI AML3细胞系相关产品：SW 839细胞、MOLP-8细胞、OVISE细胞 
UPCI-SCC-90细胞系相关产品：OCI AML4细胞、SU-DHL-10细胞、HCCC-9810细胞 
HCV-29细胞系相关产品：E.L.4细胞、NCI-H-295细胞、Hmy.2 CIR细胞 
HBMEC细胞系相关产品：LNCaP clone FGC细胞、U-266 AR1细胞、LS-174T细胞 
T-ALL1细胞系相关产品：RS(4;11)细胞、HFE-145细胞、SKMel-5细胞 
ASH-3细胞系相关产品：H-1703细胞、SW756细胞、NCI-H2342细胞 
Panc 04.03细胞系相关产品：Mono-Mac-1细胞、T2(174 x CEM.T2)细胞、L428细胞 
SKNBE细胞系相关产品：PZ-HPV-7细胞、L-132细胞、H-446细胞 
P3-X63-Ag8细胞系相关产品：Colo-678细胞、Sp2/mIL-6细胞、HEY A8细胞 
SN-12C细胞系相关产品：BRL 3A细胞、KM.12细胞、MCF7细胞 
SK.MEL.2细胞系相关产品：Strain KB细胞、NIH-3T3-L1细胞、95-D细胞 
Hep2细胞系相关产品：H-660细胞、hFOB1.19细胞、LICR-LON-HN6-R细胞 
U-251细胞系相关产品：Hs 606细胞、293E细胞、CT26-clone 25细胞 
Kasumi-1细胞系相关产品：NCIH1623细胞、HL-60 Clone 15细胞、NCI-H1155细胞 
KHYG-1细胞系相关产品：Y3细胞、GM00346细胞、BALB 3T3 clone A31细胞 
KHYG-1细胞系相关产品：Y3细胞、GM00346细胞、BALB 3T3 clone A31细胞 
NCI-H157细胞系相关产品：Tu 212细胞、SUD4细胞、CAL 12T细胞 
NCI-H1993细胞系相关产品：PTK 1细胞、HuH-6细胞、P3/NS1/Ag4-1细胞 
OSRC2细胞系相关产品：GL261细胞、Hep 3B2.1-7细胞、CA-OV-3细胞 
HCT8细胞系相关产品：P3 NS1 Ag4细胞、G361mel细胞、MDA MB231细胞 
HCO细胞系相关产品：SNU368细胞、Wien 133细胞、SJSA-1细胞 
TE 85 ClF-5细胞系相关产品：IGROV细胞、Neuro 2a细胞、NCI-SNU-886细胞 
U343细胞系相关产品：HEK AD293细胞、FO [Mouse myeloma]细胞、SKNBE(2)细胞 
NCIH2405细胞系相关产品：H-865细胞、SHG 44细胞、143TK-细胞 
Primary Liver Carcinoma/Poliomyelitis Research Foundation/5细胞系相关产品：GM04671细胞、RKOE6细胞、CW2细胞 
MFE280细胞系相关产品：EBC1细胞、MG-63细胞、BaF3细胞 
DV-90细胞系相关产品：Eca-109细胞、Wayne State University-Head and Neck 13细胞、Duck embryo细胞 
Sarcoma OSteogenic-2细胞系相关产品：8305C_1细胞、MZ-CRC-1细胞、MC116细胞 
143BTK-细胞系相关产品：H9细胞、NCIH1770细胞、HCEC细胞 
U937细胞系相关产品：Kasumi-6细胞、Rat Lung-65细胞、SF 126细胞 
KYSE450细胞系相关产品：NALM 6细胞、HEK293FT细胞、KMBC细胞 
NIH:OVCAR4细胞系相关产品：Ly8细胞、CHL-1细胞、DK-MG细胞 
F-36P细胞系相关产品：Hepa 1-6细胞、NB9细胞、PLMVEC细胞 
LM-TK-细胞系相关产品：RPTC细胞、ID8细胞、GC-2spd(ts)细胞 
LM-TK-细胞系相关产品：RPTC细胞、ID8细胞、GC-2spd(ts)细胞 
RAOEC细胞系相关产品：KNS62细胞、WSU-HN13细胞、H-1355细胞 
LN-229细胞系相关产品：RGCs细胞、786-0细胞、hSCC-25细胞 
NCI.H226细胞系相关产品：HEC1-B细胞、5-8F细胞、NCI H508细胞 
MHCC97H细胞系相关产品：Melanoma 14细胞、M-O7e细胞、H2030细胞 
HES [Human embryonic skin fibroblast] 人皮肤成纤维细胞系
PC-9S1细胞系相关产品：TK 10细胞、MDA-MB436细胞、RMG-I细胞 
HIT clone T15细胞系相关产品：NL20细胞、SVEC4-10细胞、NW-38细胞 
P3 88 D1细胞系相关产品：UM-UC-14细胞、SF-539 BT细胞、MES13细胞 
VMM-5A细胞系相关产品：CC-LP-I细胞、AtT20细胞、PL-9细胞 
Bac12F5细胞系相关产品：RERF-LCMS细胞、WEHI 164细胞、H-28细胞 
EoL-1-cell细胞系相关产品：BRL细胞、H-1048细胞、SPCA-1细胞 
NCI H295R细胞系相关产品：NCI-H1092细胞、RERFLCMS细胞、SUIT2细胞 
Wayne State University-Head and Neck 13细胞系相关产品：NU-GC-4细胞、ND7/23细胞、H1792细胞 
Primary Liver Carcinoma/Poliomyelitis Research Foundation/5细胞系相关产品：GM04671细胞、RKOE6细胞、CW2细胞 
KRCY细胞系相关产品：MDCK-II细胞、COLO-320-DM细胞、GC-2spd(ts)细胞 
CAMA-1细胞系相关产品：Human Microglia Clone 3细胞、SUIT2细胞、HFL细胞 
Hs 688(A).T细胞系相关产品：SCC25细胞、WC00097细胞、Mel624细胞 
"