RFL-6 大鼠成纤维细胞系

"RFL-6 大鼠成纤维细胞系
细胞背景资料：胚肺；成纤维细胞；SD大鼠 
细胞形态：成纤维细胞样 
细胞培养无菌操作的演示：凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用７５％酒精擦拭瓶子的外表面；靠近酒精灯火焰操作。器皿使用前必须过火灭菌，继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处，使用时仍要过火。各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：自来水刷洗，除去灰尘。烘干、泡：烤箱中烘干，然后再浸入５％稀中１２小时以除去脏物、铅、等物。刷洗、烘干：１２小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干；泡酸、清洗：用清洁液浸泡１２小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗１５次，最后蒸馏水冲洗３-５次和用双蒸水过３次。烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸(油光纸)包装。高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向１５磅时，维持２０-３０分钟。高压消毒后烘干。二、旧的玻璃器皿的洗消：刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液(洗涤剂)的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液(酸液)，１２小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗(避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗)，再用蒸馏水冲洗３次。烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸(油光纸)等包装。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
RFL-6 大鼠成纤维细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气的，大家争取做到因材施教，比如试试下面的“四步消化法”。（以难消化细胞为例），具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍（目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉）。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况把握）。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁 
RFL-6 大鼠成纤维细胞系
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
NUGC-4细胞系相关产品：WSU-DLCL-2细胞、CF-1 MEF细胞、Be-Wo细胞 
H19-7细胞系相关产品：GM07404细胞、OCI AML2细胞、SCL-II细胞 
Panc4.03细胞系相关产品：RMG-1细胞、EB2细胞、Melanoma 14细胞 
b.End3细胞系相关产品：Calu 6细胞、C1498细胞、8305-C细胞 
H650细胞系相关产品：K1细胞、SK HEP 01细胞、RLE-6TN细胞 
Hepatoma-22细胞系相关产品：NCI.H522细胞、Colo320细胞、B-104细胞 
UCLA SO M14细胞系相关产品：H-220细胞、CEF细胞、C2BBe 1细胞 
WBF344细胞系相关产品：HCC1428细胞、TF-1细胞、WRL 68细胞 
P3/ag细胞系相关产品：HECCL-1细胞、NCI-HUT-292细胞、B-cell with DC Morphology细胞 
H322细胞系相关产品：P3-x63-Ag8 653细胞、Jiyoye细胞、293F细胞 
MGH-UI细胞系相关产品：ASH3细胞、Bovine Turbinate细胞、SK-MEL3细胞 
253JBV细胞系相关产品：BT549细胞、Hs 578.T细胞、BJ [Human fibroblast]细胞 
WM-451Lu细胞系相关产品：MD Anderson-Metastatic Breast-453细胞、H-1666细胞、LN-18细胞 
LTEPsm细胞系相关产品：NCI-H596细胞、ONS76细胞、LC-1/sq细胞 
D562细胞系相关产品：MIA-PaCa-2细胞、HFT8810细胞、SHSY5Y细胞 
GP5d细胞系相关产品：SKES-1细胞、OCI-AML2细胞、Vero细胞 
HS-68细胞系相关产品：HCC-1438细胞、CCD-112 CoN细胞、ChaGo-K-1细胞 
IEC18细胞系相关产品：MB231细胞、SU-DHL1细胞、QBC-939细胞 
28SC细胞系相关产品：CCC-ESF-1细胞、HEC1A细胞、COLO201细胞 
CCC-HSF-1细胞系相关产品：McArdle RH-7777细胞、UMNSAH-DF-1细胞、2780细胞 
RFL-6 大鼠成纤维细胞系
SRA 01/04细胞系相关产品：HN4细胞、CEM-0细胞、MC38细胞 
Capan 2细胞系相关产品：CHO-K1细胞、NCI-H128细胞、ACC-3细胞 
NCI-HUT-292细胞系相关产品：NCIH2291细胞、H322T细胞、SUDHL4细胞 
H-211细胞系相关产品：SUM 190细胞、HT1197细胞、CEM C7细胞 
RPMI No. 1846细胞系相关产品：NCI-H2081细胞、MDA-MB-231 #4175细胞、SK-OV-3细胞 
H820细胞系相关产品：CHP-100细胞、PC 61细胞、IAR-20细胞 
COLO-320HSR细胞系相关产品：UACC-812细胞、G-401细胞、NIH3T3细胞 
OK-WT细胞系相关产品：BBE细胞、AML-193细胞、PLA-801C细胞 
751-NA细胞系相关产品：EFO27细胞、HeLa.S3细胞、138MG细胞 
QBC-939细胞系相关产品：RC13细胞、TSUpr1细胞、P31/Fujioka细胞 
NCI-322细胞系相关产品：H-2171细胞、H226细胞、NCI-H460细胞 
H-1993细胞系相关产品：Panc02细胞、Wistar Institute, Susan Hayflick细胞、293A细胞 
HLEB-3细胞系相关产品：MM1细胞、Ramos-2G6-4C10细胞、U266B1细胞 
JIMT1细胞系相关产品：SKMel-28细胞、CL40细胞、Calu-6细胞 
MDA-MB436细胞系相关产品：LA-795细胞、X63Ag8.653细胞、Colon 38细胞 
VP 229细胞系相关产品：COLO-680N细胞、BTI-Tn-5B1-4细胞、UM-UC3细胞 
MB231细胞系相关产品：MKN 45细胞、KNS-81细胞、NRK 49F细胞 
Biopsy xenograft of Pancreatic Carcinoma line-3细胞系相关产品：FU-97细胞、OCM-1细胞、WM-451Lu细胞 
IPLB-SF 21细胞系相关产品：HITT15细胞、RIN Cl-5F细胞、CLL-CII细胞 
H3255_DA细胞系相关产品：HCS2/8细胞、KPL-4细胞、OCI Ly3细胞 
Hs27F细胞系相关产品：LWnt3A细胞、IPLB-Sf21-AE细胞、HLEpiC细胞 
SKCO 1细胞系相关产品：TE32细胞、JJN3细胞、MDA-MB 231细胞 
BJ [Human fibroblast]细胞系相关产品：H-2591细胞、PGBE1细胞、JCA-1细胞 
RT-4细胞系相关产品：CCRFCEM细胞、HPDE6c7细胞、ASH-3细胞 
Rat1细胞系相关产品：INS-1细胞、HPaSteC(HPSC)细胞、SW 780细胞 
SKMEL3细胞系相关产品：H146细胞、NCI-ADR-RES细胞、COV434细胞 
HRMC细胞系相关产品：Institute for Medical Research-90细胞、3T3-Swiss细胞、Hs852T细胞 
H-1876细胞系相关产品：DHL-6细胞、SNU-182细胞、AML-193细胞 
U2-OS细胞系相关产品：bEnd3细胞、SK-RC-52细胞、OAW-42细胞 
H-810细胞系相关产品：SKRC-42细胞、COLO-320DM细胞、H 9细胞 
TE3A细胞系相关产品：U266B1细胞、HOSEpiC细胞、A172细胞 
HCC2935细胞系相关产品：GLC82细胞、L5178Y TK+/-3.7.2c细胞、OC-3-VGH细胞 
H-1703细胞系相关产品：Porcine Kidney-13细胞、IOSE 80细胞、U343MG细胞 
Jurkat-FHCRC细胞系相关产品：SNK-1细胞、SKLMS1细胞、H-508细胞 
SL1细胞系相关产品：Cates-1B细胞、NCI-H2347细胞、TFK1细胞 
Vero 76细胞系相关产品：SK-N-BE(1)细胞、HM细胞、PG-4 S+L-细胞 
H460细胞系相关产品：Karpas 299细胞、87MG细胞、MA 104细胞 
LA-N-6细胞系相关产品：NCIH1781细胞、HLEC-SRA 01/04细胞、KLN 205细胞 
UCLA SO M21细胞系相关产品：MAVER-1细胞、Mono Mac 6细胞、SF-295细胞 
DSL-6A-C1细胞系相关产品：HTh 74细胞、SW-1271细胞、HMEC细胞 
SUDHL-6细胞系相关产品：MCF-10 Attached细胞、University of Michigan-Renal Carcinoma-2细胞、RGC-5细胞 
RFL-6 大鼠成纤维细胞系
Virginia Mason Research Center-Lung Cancer D细胞系相关产品：H211细胞、CLL-CII细胞、bEnd.3[BEND3]细胞 
SNU-C1细胞系相关产品：NGP细胞、GLAG-66细胞、Ly7细胞 
HCC1359细胞系相关产品：SU-DHL2细胞、MC3T3-E1 Subclone 24细胞、LL/2 (LLC1)细胞 
HIT-T15细胞系相关产品：SMA560细胞、H747细胞、SNU886细胞 
NCIH1184细胞系相关产品：AU-565细胞、H498细胞、H-847细胞 
HuT78细胞系相关产品：P3J HR1-K细胞、MHCC 97细胞、TALL-1 [Human adult T-ALL]细胞 
HBVSMC细胞系相关产品：CAL-27细胞、Kelly细胞、OCI AML4细胞 
HTh74细胞系相关产品：NCI-H1568细胞、KG1A细胞、KY-50细胞 
SUPM2细胞系相关产品：GM05887A细胞、JAR细胞、Tu177细胞 
NPC-TW039细胞系相关产品：Madison lung细胞、OsA-CL细胞、NB-9细胞 
HuH1细胞系相关产品：NCI-H747细胞、VAESBJ细胞、JB6Cl30细胞 
Panc4.03细胞系相关产品：RMG-1细胞、OCI/AML-3细胞、C3H 10T1/2细胞 
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