RL-65 大鼠肺上皮细胞系

"RL-65 大鼠肺上皮细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍 
细胞形态：上皮细胞样 
细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升高到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
RL-65 大鼠肺上皮细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
冻存和复苏的原则：慢冻快融》当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序：采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时，1~2℃/min；当温度达-25℃以下时，5~10℃/min；当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中。2.简易程序：将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1~2℃的速度，在40min内降至液氮表面过夜，次晨投人液氮中。3.传统程序：冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时（或隔夜）→液氮槽长期储存。细胞冻存方法：1.预先配制冻存液》（1）8%DMSO+细胞生长液（92%血清）2.取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×10(6)~5×10(6)细胞/ml）。3.加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法：1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1分钟内全部融化（不要超过3分钟）。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养，24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液，以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂特别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分 
RL-65 大鼠肺上皮细胞系
因为细胞生长的时候肯定是要相互联系，大部分的细胞都是要成片生长的，尤其是对于贴壁细胞，单个细胞贴壁之后长着长着就长到一片去了。但是如果是成片的细胞抱团的话，传代后细胞是不能贴壁的，这样抱团的细胞就会死亡。所以，消化传代的时候一定要将细胞消化成单个单个的独立状态，这个啊是非常考究你的功夫的！细胞一旦脱落入悬液里你很难再将他吹打成单个，因为他没有受力点了。很难找到受力点让你对他吹打的力分散开细胞。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，受力点就是细胞贴壁的地方。这样你就必须要严格控制好消化的程度啊，这和大师做饭掌握好火候是一样的道理啊。既要消化到容易吹打下来，又不能太过，一吹就整片脱落，要单个单个地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是为了保证不同生长状态贴壁程度的细胞能够都维持在好的受力点分散开。这个是很重要的一点。尤其是对于某些细胞这一点就是他活去死的致命点。像Caco-２细胞就是如此。另外关于传代很重要一点就是一定不能等到细胞长满的时候才去消化传代。要在细胞长到７０%左右的时候就要传代了，一旦发现细胞生长中已经有叠层生长的时候就要立即进行消化传代。不能再拖了。关于换液传代时候洗瓶的问题。对于用DMEM培养基培养的细胞，你在洗的时候如果是用无血清１６４０去洗细胞在随即后的几次中会比用DMEM洗的长的要好。同样，用１６４０培养的也有这个现象。如果不嫌麻烦的话，可以用PBS来洗，洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的，对于有些细胞会更胜一筹。洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清，防止它对胰酶的影响。这样能够保证胰酶的消化能力优先，是很关键的一点。先补充这么多，还会后续更新。再补充一点：传代时PBS洗是很重要的一步，最近发现，用PBS就可以把细胞消化开来。加入PBS放置１０-１５分钟，有些需要更长的时间，等到细胞一个个分离开来的时候，就可以直接吹打下来，但是和胰酶消化一样，要控制好时间，不能时间太过了，要不然损伤细胞，细胞不容易成活，状态容易不好。这个方法对于某些细胞是很管用的。有些细胞用胰酶消化不容易消化成单个的时候，或者临时没有胰酶了，可以选用此方法。不过一定要试试，看是否适合你的细胞。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
NCIH1915细胞系相关产品：SW260细胞、293细胞、MDA 435细胞 
CZ-1细胞系相关产品：ST细胞、EFO-27细胞、HMC细胞 
HEK293EBNA细胞系相关产品：OACP4 C细胞、NCIH2110细胞、3AA细胞 
L5178Y TK+/-3.7.2c细胞系相关产品：293S细胞、A375mel细胞、H4IIEC3细胞 
H-2009细胞系相关产品：NTera 2细胞、SJSA-1细胞、Caco2-BBE细胞 
HHUA细胞系相关产品：U266BL细胞、Hs-578Bst细胞、NK92-MI细胞 
CC-LP-I细胞系相关产品：MES-SA Dx5细胞、NCIH2052细胞、OVHM细胞 
Molm 14细胞系相关产品：M-O7e细胞、HCO细胞、38C-13细胞 
AGS细胞系相关产品：Glioma 261细胞、B 95.8细胞、H-596细胞 
PM6细胞系相关产品：H-1694细胞、hEEC细胞、HCT116细胞 
A101D细胞系相关产品：SNU-C2B细胞、NCI-A549细胞、B6Tert-1细胞 
THP-1(ATCC)细胞系相关产品：J.E6-1细胞、BLO-11细胞、Vero 76细胞 
L细胞系相关产品：PMVEC细胞、DU-4475细胞、NCI-SNU-668细胞 
NCIH1341细胞系相关产品：L5178-R细胞、WRL68细胞、HCC-827细胞 
SKRC-42细胞系相关产品：H-1618细胞、Ra No. 1细胞、NK-92MI细胞 
H929细胞系相关产品：639 V细胞、VK-2/E6E7细胞、NOK细胞 
H929细胞系相关产品：639 V细胞、VK-2/E6E7细胞、NOK细胞 
A9(Hamprecht)细胞系相关产品：SCC-15细胞、HCC-1359细胞、PC-14细胞 
EU-2细胞系相关产品：TE-11细胞、Roswell Park Memorial Institute 7951细胞、NCI-H1404细胞 
OPM2细胞系相关产品：KP-N-YN细胞、SKRC 39细胞、RSC-364细胞 
RL-65 大鼠肺上皮细胞系
K299细胞系相关产品：CL34细胞、H-2347细胞、NK-92细胞 
BC-024细胞系相关产品：MGH-UI细胞、SUM 159细胞、MV-1-Lu细胞 
COLO 320HSR细胞系相关产品：A 72细胞、OV90细胞、HHL-5细胞 
XWLC-05细胞系相关产品：H1770细胞、V79-1细胞、Hela-mock细胞 
Vx2细胞系相关产品：697细胞、NCIH2196细胞、Psi-2 DAP细胞 
A375S2细胞系相关产品：H1341细胞、PANC 1005细胞、PNT1-a细胞 
HCC-1395细胞系相关产品：SCaBER细胞、MOLP8细胞、HO1-N1细胞 
MDA415细胞系相关产品：H2135细胞、A 375细胞、HPDLF细胞 
Y3.AG.1.2.3细胞系相关产品：Rat Fetal Lung-6细胞、MES-SA/Dx5细胞、TALL 1细胞 
EAhy 926细胞系相关产品：SU86_86细胞、SK-MES-1细胞、huH 1细胞 
NCI-H322T细胞系相关产品：Rh30细胞、H-660细胞、BC-PAP细胞 
Y3-Ag 1.2.3细胞系相关产品：0V-1063细胞、DU_145细胞、ECC-10细胞 
BC-PAP细胞系相关产品：NMCG-1细胞、QG56细胞、WM 239A细胞 
University of Arizona Cell Culture-893细胞系相关产品：GM2132细胞、SKBr3细胞、Sp2/O细胞 
OUMS23细胞系相关产品：LA795细胞、WEHI-164细胞、Panc 03.27细胞 
SUM 52细胞系相关产品：MDA415细胞、SU86-86细胞、SKRC-20细胞 
HT 115细胞系相关产品：SBC5细胞、H2171细胞、KYSE520细胞 
CHOK1细胞系相关产品：SKRC20细胞、R 1610细胞、KHYG-1细胞 
CFSC-8B细胞系相关产品：L-6 myoblast细胞、HCAEC细胞、M20 [Human melanoma]细胞 
Centre Antoine Lacassagne-85-1细胞系相关产品：CHP-212细胞、Caco2BBe细胞、MDA330细胞 
hTERT RPE1细胞系相关产品：RPMI-8226细胞、MHCC97-H细胞、H-2108细胞 
SU86_86细胞系相关产品：HFL-I细胞、Melan-a细胞、L-Wnt3A细胞 
PF382细胞系相关产品：FRTL-5 Cl 2细胞、RWPE1细胞、PC 61 5.3细胞 
HR-1细胞系相关产品：HEK293F细胞、Walker-256-TC细胞、SNU638细胞 
V-79-4细胞系相关产品：HBZY 1细胞、C3H/10T1/2 clone 8细胞、A204细胞 
DSL6A/C1细胞系相关产品：HSC-4细胞、SW 900细胞、LK-2细胞 
HCAEC细胞系相关产品：NCIH522细胞、H.Ep.-2细胞、PLC细胞 
brain-derived Endothelial cells.3细胞系相关产品：NH-6细胞、RPMI 7951细胞、OCI-Ly 3细胞 
NCIH820细胞系相关产品：HBE细胞、SNU-668细胞、SKBr3细胞 
CHL/IU细胞系相关产品：NCI-747细胞、DoTc2细胞、MOLP8细胞 
SNU5细胞系相关产品：NCI-SNU-C2B细胞、Hela-Ap-1细胞、HEK 293-EBNA细胞 
Mouse Podocyte Clone-5细胞系相关产品：DSL-6A/C1细胞、HCEC-12细胞、U-251细胞 
MN-9D细胞系相关产品：Mono Mac6细胞、BT549细胞、H-2405细胞 
Anip-973细胞系相关产品：D 407细胞、HR-8348细胞、RKOE6细胞 
IPEC-J2细胞系相关产品：NT2细胞、Det. 562细胞、ACC-M细胞 
UWB1-289细胞系相关产品：A2780/CP细胞、HHFK细胞、DBTRG-05MG细胞 
SKMES-1细胞系相关产品：PCI-04B细胞、MDBK细胞、GES1细胞 
SGC996细胞系相关产品：HEI-193细胞、HDF-a细胞、SNU-407细胞 
Strain V细胞系相关产品：NeHepLxHT细胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-4细胞、SUDHL6细胞 
H23细胞系相关产品：EC-GI细胞、HUSMC细胞、2T细胞 
ST细胞系相关产品：HGF-1细胞、THPI细胞、RGM-1细胞 
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ME 180细胞系相关产品：RCM-1 [Human rectum adenocarcinoma]细胞、RD 2细胞、IR 983F细胞 
C 643细胞系相关产品：NPC-TW 01细胞、HTh74细胞、MDA-453细胞 
HNE2细胞系相关产品：SKN-AS细胞、Panc-05.04细胞、HPAEC细胞 
HCC1428细胞系相关产品：P-388细胞、CTLL-2细胞、NR8383.1细胞 
T-ALL 1细胞系相关产品：ZR75-30细胞、NUGC-3细胞、OCI-Ly 19细胞 
Alexander cells细胞系相关产品：HEK 293 c18细胞、M2-10B4细胞、CAL 85-1细胞 
GM02219细胞系相关产品：KMY1022细胞、KP-2细胞、MDA 231-LM2-4175细胞 
HDQP1细胞系相关产品：Tissue Culture-1细胞、HuP-T4细胞、Ect1/E6E7细胞 
OCI AML3细胞系相关产品：SW 839细胞、MOLP-8细胞、OVISE细胞 
MeWo细胞系相关产品：OCI-Ly3细胞、87 MG细胞、OS-732细胞 
NB1-RGB细胞系相关产品：D10.G4.1细胞、HT144-mel细胞、Tu-177细胞 
HEK-293-EBNA细胞系相关产品：32Dcl3细胞、SCL2细胞、PE/CA-PJ34 (clone C12)细胞 
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