MFM-223 人乳腺癌细胞系

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细胞背景资料：详见相关文献介绍 
细胞形态：上皮细胞样 
细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升高到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
MFM-223 人乳腺癌细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
公司细胞库冻存并保种有2300多种各类细胞系。针对每种不同的细胞系，公司摸索并积累了大量细胞培养条件和优化参数，为您的细胞实验保驾护航。细胞培养是生命科学研究中最基础、也是最常用的实验手段。从冻存→复苏→传代→实验，在每一次细胞培养的过程中我们都是精心呵护，小心培养，心里都是默默承诺：我要护你一世周全！可是可是……无数次细胞都因污染而离我而去，投入的不只是我们貌美如花的青春，还有那一去不复返的经费！在细胞生物学，生物化学，免疫学，神经生物学，病理学……只要涉及细胞的研究领域，都面临着支原体污染的威胁。在众多污染物中，也就属支原体最狡猾了，他最善于隐藏自己，因为被支原体污染的细胞不会马上死亡，但会改变细胞的新陈代谢，甚至会改变细胞的基因表达谱，我们就这样被欺骗了无数次，谁让我们就是个看“颜值”的花痴了。可是我们通过被虐了几百次的经验中总结出来，当你的细胞出现了这些症状时：生长速率改变；活性减弱；形态改变；染色体畸变；转染效率显著降低；细胞复苏后存活率降低……。那你就得千万小心了，也许你的细胞已经被支原体欺凌了！ 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分 
MFM-223 人乳腺癌细胞系
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
SK-N-SH细胞系相关产品：Moorfields/Institute of Ophthalmology-Muller 1细胞、DMS-79细胞、STC-1细胞 
A2780/CP70细胞系相关产品：A-375SM细胞、SNU-16细胞、alpha TC1-6细胞 
UO31细胞系相关产品：MHH-CALL-2细胞、MV-4:11细胞、293 HEK细胞 
KTCTL-140细胞系相关产品：C518细胞、COLO 684细胞、H-1954细胞 
253J-BV细胞系相关产品：VK2/E6E7细胞、RPE-1细胞、Michigan Cancer Foundation-7细胞 
COLO201细胞系相关产品：Duke University 4475细胞、BC-PAP细胞、Karpas422细胞 
SW-837细胞系相关产品：P3HR-1细胞、WM451Lu细胞、TCam-2细胞 
SF 126细胞系相关产品：B16/BL6细胞、BSC-1细胞、SUM102细胞 
H-2029细胞系相关产品：NCTC-929细胞、UM-UC3细胞、SK MES 1细胞 
HuPT3细胞系相关产品：LU165细胞、624-mel细胞、COLO-738细胞 
TPC-1细胞系相关产品：OUMS23细胞、D407 RPE细胞、RTE细胞 
Centre Antoine Lacassagne-148细胞系相关产品：ARO-81细胞、A2058细胞、AdHek细胞 
H548细胞系相关产品：Jurkat, Clone E6-1细胞、CCD18Co细胞、TSCCa细胞 
RT4-D6-P2T细胞系相关产品：CAKI.1细胞、H-2196细胞、AR-42J细胞 
RL-95-2细胞系相关产品：SK-ES-1细胞、Y3-Ag123细胞、SUDHL2细胞 
HRC-99细胞系相关产品：CW-2细胞、HA1800细胞、MO59J细胞 
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HEK-AD293细胞系相关产品：KASUMI1细胞、ROS1728细胞、LA-N-5细胞 
WIL2S细胞系相关产品：TGW细胞、HOC细胞、SF-539细胞 
NK 10a细胞系相关产品：NCIH1734细胞、alpha TC1.6细胞、MPP-89细胞 
MFM-223 人乳腺癌细胞系
MOLM-13细胞系相关产品：NCI N87细胞、Sol8细胞、WEHI3B细胞 
NCI-H2591细胞系相关产品：AML 12细胞、MC38细胞、Tu 212细胞 
H-226细胞系相关产品：RSC96细胞、CAL 62细胞、NCI-H28细胞 
P36细胞系相关产品：MGSMC细胞、NCIH2227细胞、NHDF细胞 
MV4;11细胞系相关产品：Transformed Human Liver Epithelial-2细胞、LICR-HN6细胞、PA1细胞 
T_T_细胞系相关产品：BN-CL2细胞、NCIH82细胞、LP1细胞 
WEHI3细胞系相关产品：Hs294T细胞、RPMI-7951细胞、SGC7901/DDP细胞 
751-NA细胞系相关产品：EFO27细胞、HeLa.S3细胞、138MG细胞 
Baby Hamster Kidney-21细胞系相关产品：UMC-11细胞、SW527细胞、HCC4006细胞 
J 82细胞系相关产品：RK-13细胞、MNNG-HOS (TE 85, clone F-5)细胞、REC细胞 
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SKRC 39细胞系相关产品：JM1细胞、HOCF细胞、NCI H69细胞 
Hs895T细胞系相关产品：Roswell Park Memorial Institute 7951细胞、SK-N-AS细胞、MOLP2细胞 
NU-GC-4细胞系相关产品：TK-1细胞、Ramos G6.C10细胞、BERH-2细胞 
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DV90细胞系相关产品：SRA01/04 (HLE)细胞、RenCa细胞、373 MG细胞 
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BBE细胞系相关产品：Kupffer细胞、Y1细胞、HuCCT-1细胞 
IEC-18细胞系相关产品：McA-RH7777细胞、CTV1细胞、Kit 225细胞 
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COLO 320 HSR细胞系相关产品：DR2R1610细胞、E0771细胞、H-498细胞 
SRS-82细胞系相关产品：BIC-1细胞、MDA-MB415细胞、UMNSAH-DF-1细胞 
P3-X63Ag8细胞系相关产品：HCC 2185细胞、Reuber H35细胞、H460细胞 
MDA-MB-134VI细胞系相关产品：OCI-AML3细胞、LM-TK-细胞、NCI-H2087细胞 
RPMI No. 1846细胞系相关产品：NCI-H2081细胞、MDA-MB-231 #4175细胞、SK-OV-3细胞 
T98 G细胞系相关产品：Colon38细胞、MMQ细胞、32D.cl3细胞 
Capan 2细胞系相关产品：CHO-K1细胞、NCI-H128细胞、ACC-3细胞 
H841细胞系相关产品：B16 F1细胞、MonoMac1细胞、TE-671细胞 
H711细胞系相关产品：IMCD-3细胞、SW 982细胞、MGHU3细胞 
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KM-12细胞系相关产品：T8细胞、MZCRC1细胞、U-251 MG细胞 
Vero E6细胞系相关产品：HL-60细胞、OCIAML3细胞、HOS TE 85细胞 
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H1781细胞系相关产品：MAC1细胞、mREC细胞、HEC151细胞 
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U-373 MG细胞系相关产品：L-132细胞、GES-1细胞、MGHU3细胞 
UO31细胞系相关产品：MHH-CALL-2细胞、Toledo细胞、A.704细胞 
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