COLO 738 人胸腔积液恶性纤维组织细胞系

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细胞背景资料：详见相关文献介绍 
细胞形态：上皮细胞样 
细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升高到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
COLO 738 人胸腔积液恶性纤维组织细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
冻存和复苏的原则：慢冻快融》当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序：采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时，1~2℃/min；当温度达-25℃以下时，5~10℃/min；当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中。2.简易程序：将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1~2℃的速度，在40min内降至液氮表面过夜，次晨投人液氮中。3.传统程序：冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时（或隔夜）→液氮槽长期储存。细胞冻存方法：1.预先配制冻存液》（1）8%DMSO+细胞生长液（92%血清）2.取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×10(6)~5×10(6)细胞/ml）。3.加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法：1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1分钟内全部融化（不要超过3分钟）。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养，24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液，以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂特别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分 
COLO 738 人胸腔积液恶性纤维组织细胞系
细胞培养实验相关问题总结：支原体(mycoplasma)污染的细胞，是否能以肉眼观察出异状？不能。除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨之；支原体污染会对细胞培养有何影响？支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数，代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义；侦测出细胞株有支原体污染时，该如何处理？直接灭菌后丢弃，以避免污染其它细胞株；CO２培养箱之水盘如何保持清洁？定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之；为何培养基保存于４°C冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值会越来越偏碱性？培养基保存于４°C冰箱中，培养基内之CO２会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red)的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果，将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤之CO２，以调整pH值；购买之细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可；购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–８０°C太久；收到之冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
H-157细胞系相关产品：U266 B1细胞、NCI-H1876细胞、Panc10.05细胞 
Tadarida brasiliensis 1 lung细胞系相关产品：JCA-1细胞、SCC15细胞、P30/OHK细胞 
Baby Hamster Kidney-21细胞系相关产品：UMC-11细胞、SW527细胞、HCC4006细胞 
HUC-1细胞系相关产品：NCI-H187细胞、Astrocyte type I clone细胞、TE-12细胞 
SW579细胞系相关产品：Human ErythroLeukemia细胞、HS766T细胞、Ej138细胞 
P-3J细胞系相关产品：TE14细胞、NCI-H1944细胞、VMCUB-1细胞 
MNNG细胞系相关产品：I90细胞、Clone 929细胞、SW 839细胞 
P30/Ohkubo细胞系相关产品：OVCAR 433细胞、SUM 149细胞、CEM T4细胞 
CX1细胞系相关产品：RH7777细胞、SW 1417细胞、H-716细胞 
786O细胞系相关产品：OCI-Ly 1细胞、NCI/ADR-RES细胞、NCI-H441-4细胞 
H2.35细胞系相关产品：LNT-229细胞、CCD1112Sk细胞、Karpas 299细胞 
Nb-2细胞系相关产品：C666-1细胞、SK MEL 5细胞、CL40细胞 
TGW细胞系相关产品：Clone Y-1细胞、ARO细胞、RCC-JF细胞 
DHBE细胞系相关产品：SW900细胞、Suzhou Human Glioma-44细胞、Hep 3B2_1-7细胞 
Embryonic Bovine Tracheal cells细胞系相关产品：NCM460细胞、HNE2细胞、DMS 153细胞 
CEM-C1细胞系相关产品：Reuber H35细胞、AG06814-J细胞、Hs 729细胞 
CEM-C1细胞系相关产品：Reuber H35细胞、AG06814-J细胞、Hs 729细胞 
Human Embryo Kidney-2细胞系相关产品：U-251-MG细胞、JROECL 21细胞、C-26细胞 
MKN 7细胞系相关产品：MCAEC细胞、COR-L279细胞、JEG-3细胞 
130 T细胞系相关产品：H2106细胞、3396细胞、MDAMB231细胞 
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SKMEL5细胞系相关产品：C57 Mouse Tumor 93细胞、PC-3M-1E8细胞、293-EBNA1细胞 
LMH细胞系相关产品：SAOS 2细胞、Madin-Darby Canine Kidney细胞、NCI-H920细胞 
NH-6细胞系相关产品：SKNBE-2细胞、HS0578T细胞、SK-MES1细胞 
EU-4细胞系相关产品：FUOV1细胞、ZYM-DIEC02细胞、HEK-293F细胞 
HT1197细胞系相关产品：190PT细胞、MKN1细胞、A-375细胞 
WRL68细胞系相关产品：D-283细胞、H-2107细胞、LC-2/ad细胞 
NOK细胞系相关产品：Biologics Standards-Cercopithecus-1细胞、RPMI 1846细胞、DoHH2细胞 
BMDC细胞系相关产品：KGN细胞、AHH-1细胞、MDA MB 231细胞 
MES-SA Dx5细胞系相关产品：Hs294细胞、HSC6细胞、C-33 A细胞 
KP2细胞系相关产品：Hs832.Tc细胞、PAa细胞、NRCC细胞 
SLK细胞系相关产品：SUM-52-PE细胞、SK_N_BE2C细胞、CAMA细胞 
PBMC细胞系相关产品：kms 11细胞、LLC-MK-2细胞、526-mel细胞 
HCT-GEO细胞系相关产品：SF 126细胞、H460细胞、NALM6细胞 
FHs 74 Int细胞系相关产品：KPL1细胞、H-510细胞、HEC-251细胞 
Vero 76细胞系相关产品：SK-N-BE(1)细胞、HM细胞、PG-4 S+L-细胞 
GM 2132细胞系相关产品：GM04154B细胞、GI-1细胞、EFM-192A细胞 
Hs 604.T细胞系相关产品：H2073细胞、L(TK-)细胞、U266-B1细胞 
RINm-5F细胞系相关产品：Capan-2细胞、NCIH1781细胞、hs 68细胞 
H-28细胞系相关产品：NCIH2126细胞、NCI-H2228细胞、UACC-812细胞 
SK_N_BE2C细胞系相关产品：MSTO-211 H细胞、NCI-H865细胞、NCIH2126细胞 
J 774A.1细胞系相关产品：Panc4.03细胞、SKCol1细胞、KBM-5细胞 
RT112细胞系相关产品：RS4;11细胞、P 815细胞、HaCaT细胞 
Turbot Embryonic Cell line细胞系相关产品：RAOEC细胞、SKNEP细胞、Caco-2/BBe细胞 
H-1385细胞系相关产品：WIL2 Secreting细胞、H125细胞、Bat lung细胞 
NCI-H322细胞系相关产品：CEM-T4细胞、MCA205细胞、BT 20细胞 
Tu-686细胞系相关产品：HEK-AD 293细胞、Tohoku Hospital Pediatrics-1细胞、ROS 17/2.8细胞 
BOWES细胞系相关产品：T 24细胞、MDA 435细胞、3T3-A31细胞 
NCIH548细胞系相关产品：COLO 679细胞、HGC27细胞、NCI-H838细胞 
NCI-H1355细胞系相关产品：NCI-H1618细胞、COLO-1细胞、T 24细胞 
NCI-H1105细胞系相关产品：NCI-H1694细胞、RKO-E6细胞、Sup T-1细胞 
Neuro2a细胞系相关产品：DKMG细胞、IPAM-WT细胞、H-1651细胞 
MC3T3, E1 subgroup-4 clone细胞系相关产品：Ketr-3细胞、HAPI细胞、C-6细胞 
NTC-200细胞系相关产品：Panc-05.04细胞、MDAMB-231细胞、K7M2 wt细胞 
PCI-4M细胞系相关产品：hTERT RPE1细胞、52PE细胞、WM451Lu细胞 
RPMI2650细胞系相关产品：H747细胞、HEC-1-A细胞、HS688AT细胞 
CAL 62细胞系相关产品：NTC200细胞、TB1 Lu细胞、SP2-0-Ag14细胞 
IPLB-SF 21AE细胞系相关产品：SKO3细胞、Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2细胞、HCC-2108细胞 
Panc-03.27细胞系相关产品：COLO 320F细胞、NKT细胞、B16-BL6细胞 
AMJ2C8细胞系相关产品：Capan 2细胞、BE2C细胞、X63-Ag 8.6.5.3细胞 
H-650细胞系相关产品：LCLC103H细胞、ARO 81-1细胞、AtT 20细胞 
HGC-27细胞系相关产品：FLS细胞、H510细胞、Roswell Park Memorial Institute 7951细胞 
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BT 549细胞系相关产品：DU4475细胞、HS-729细胞、Mouse podocyte细胞 
SUM-102PT细胞系相关产品：MZCRC1细胞、UWB1289细胞、D283细胞 
MESSA/Dx5细胞系相关产品：KM12-SM细胞、HLEC-B3细胞、MEG01细胞 
PCI-4.2细胞系相关产品：CWR22-R1细胞、D-283细胞、DMS114细胞 
NALM-6-M1细胞系相关产品：HCC-15细胞、KRCY细胞、LAD 2细胞 
HO1-N-1细胞系相关产品：143TK-细胞、NCIH847细胞、YD15细胞 
OVCAR4细胞系相关产品：PL45细胞、Duke University 145细胞、H-2195细胞 
WSU-DLCL2细胞系相关产品：RL-95-2细胞、MIO-M1细胞、CEM/C1细胞 
HEK-AD293细胞系相关产品：KASUMI1细胞、ROS1728细胞、LA-N-5细胞 
M1细胞系相关产品：VM-CUB-1细胞、PC3M-2B4细胞、HT-3细胞 
BC-019细胞系相关产品：OVCAR 8细胞、MDAMB175细胞、SCL I细胞 
Baby Hamster Kidney-21细胞系相关产品：UMC-11细胞、OCI-AML-3细胞、H196细胞 
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