TCC-PAN2 人腹水转移癌细胞系

"TCC-PAN2 人腹水转移癌细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍 
细胞形态：上皮细胞样 
常见培养细胞预防污染的有效措施：体外培养的细胞受到严重污染时，有时即使想尽各种办法也难以挽回。因此，防止污染，预防是关键。只有将预防措施贯穿于整个细胞培养的始终，才能将发生污染的可能性降到最小程度。一般预防可从以下几方面着手：１)添加抗生素：各种抗生素性质不同，对各种微生物的作用也不同，联合应用比单用效果好，预防性应用比污染后使用好(但迄今尚无对抗支原体特效抗生素)。但反复使用抗生素会使微生物产生耐药性，且对细胞本身也有一定影响，因此为避免诱导抗药细菌，应定期更换培养系统中的抗生素，或尽可能不用抗生素处理；２)从物品、用品消毒灭菌着手：细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在取样检菌一周后确认无菌才能使用。同时，在无菌过滤操作中，随着滤过体积的增大，滤膜破损的可能性增加，故应选择最后过滤的液体进行检测。定期对二氧化碳培养箱进行消毒。具体操作：７５%的酒精搽拭培养箱后，使用可移动的紫外灯至少消毒３０min，加入高压灭菌过的超纯水于培养箱水槽中保持湿度。也可配制３００ml的饱和酸铜加３L灭菌超纯水混合成酸铜溶液加入水槽中。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
TCC-PAN2 人腹水转移癌细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
细胞可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。细胞接收后的处理方式：收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们；请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h；弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的完全培养基；如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代；接到细胞第二天，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。细胞培养步及冻存条件：骤准备细胞所需培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%；培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%；冻存液：92%血清，8%DMSO，现用现配。细胞复苏及何时传代：复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分 
TCC-PAN2 人腹水转移癌细胞系
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
HeLa 229细胞系相关产品：NTERA-2cl.D1细胞、LS 180细胞、FRTL5细胞 
HCE-T细胞系相关产品：Panc-8_13细胞、CBRH-7919细胞、HTh-74细胞 
BEL 7402细胞系相关产品：HTR-8/SVneo细胞、SW403细胞、NT-2细胞 
SJ-Rh 30细胞系相关产品：LLC PK1细胞、H716细胞、RKN细胞 
LOU-NH-91细胞系相关产品：MCF-7/AdrR细胞、SUP-M2细胞、C-33-A细胞 
PaCa2细胞系相关产品：NTera-2D1细胞、118MG细胞、OCILY19细胞 
Jurkat E6.1细胞系相关产品：H-1869细胞、H2291细胞、NCI522细胞 
MDA-361细胞系相关产品：MCF7-CTRL细胞、C-28/I2细胞、MFE-280细胞 
COLO_320DM细胞系相关产品：HANK-1细胞、SUDHL-8细胞、H22细胞 
RA-FLSs细胞系相关产品：HCC0044细胞、ZR75-30细胞、L6细胞 
CF-PAC1细胞系相关产品：NCIH2452细胞、P30/Ohkubo细胞、NCC-IT细胞 
MuM-2C细胞系相关产品：Hs688(A)T细胞、Calu6细胞、OV2008细胞 
SW-1222细胞系相关产品：SEG1细胞、GTL 16细胞、RCK-8细胞 
SW 1088细胞系相关产品：NTera2/D1细胞、Hs888T细胞、ECV 304细胞 
GM03570E细胞系相关产品：SU-DHL-2细胞、WM-239A细胞、Lu-165细胞 
NCI-H209细胞系相关产品：RA.1细胞、H1693细胞、KBM-7细胞 
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Japanese Tissue Culture-39细胞系相关产品：HCT-8细胞、Human Embryo Lung-1细胞、LLC-PK(1)细胞 
U2932细胞系相关产品：RL95细胞、Rat-1细胞、HUT-226细胞 
Hi-five细胞系相关产品：HTh-74细胞、CAL851细胞、NCIH211细胞 
TCC-PAN2 人腹水转移癌细胞系
CII细胞系相关产品：MLFC细胞、bEnd3细胞、HEL92.1.7细胞 
HO-8910细胞系相关产品：H2081细胞、LA-795细胞、SUM159PT细胞 
MDA-MB 453细胞系相关产品：LoVo细胞、NCI-H727细胞、2780CP细胞 
HCC 94细胞系相关产品：624mel细胞、SK-MEL 28细胞、hTERT RPE-1细胞 
H661细胞系相关产品：ABC1细胞、BHK21细胞、TSUpr1细胞 
U-138MG细胞系相关产品：NS-20Y细胞、PC-9S1细胞、HFTF细胞 
TALL-1 [Human adult T-ALL]细胞系相关产品：NCI-1155细胞、H-2052细胞、Panc05.04细胞 
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Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-4细胞系相关产品：MDA-MB361细胞、SW-837细胞、Cloudman M3细胞 
U-2OS细胞系相关产品：RT 112细胞、OLN93细胞、NS653细胞 
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BT474细胞系相关产品：H-727细胞、McA-RH8994细胞、MS-751细胞 
VB细胞系相关产品：NCI-H526细胞、H-2452细胞、CCC-HEH-2细胞 
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H-196细胞系相关产品：HCC941122细胞、NCIH510细胞、X63Ag8-653细胞 
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HUC-1细胞系相关产品：NCI-H187细胞、Astrocyte type I clone细胞、TE-12细胞 
RT4P细胞系相关产品：Hep 3B2细胞、DMS153细胞、FRhK-4细胞 
SACC83细胞系相关产品：BMSCs（mBMSCs）细胞、MLMA细胞、SF17细胞 
JROECL 21细胞系相关产品：KATOIII细胞、MD Anderson-Metastatic Breast-231细胞、MeT5A细胞 
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BEL 7402细胞系相关产品：HTR-8/SVneo细胞、EJ1细胞、H-446细胞 
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