WTRL1 大鼠肺细胞系

"WTRL1 大鼠肺细胞系
细胞背景资料：肺；成纤维样细胞；雄性 
细胞形态：上皮细胞样 
细胞传代培养的胰酶消化法：传代培养：是指细胞从一个培养瓶以１：２或１：２以上的比例转移，接种到另一培养瓶的培养。传代细胞，可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代，部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。实验步骤：①入无菌室之前用肥皂洗手，再用７５% 的酒精擦拭消毒双手；②倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液３７℃下预热；③超净台台面应整洁，用７５%酒精棉球擦拭清洁；④打开超净工作台的紫外灯照射台面２０min左右，关闭紫外灯，打开风机清洁空气除去臭氧；⑤点燃酒精灯;取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内；⑥将培养用液瓶口用７５%酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上；⑦倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用２-３ml Hanks液洗去残留的就培养基，或用少量胰酶涮洗一下；⑧每个大培养瓶加入１ml胰酶，小培养瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察。当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中；⑨加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(７-１０ml/大瓶;３-５ml/小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。盖好瓶盖，适度拧紧后稍回转，以利于CO２的进入，将培养瓶放回CO２培养箱；⑩对悬浮培养细胞，步骤７-９不做。直接将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
WTRL1 大鼠肺细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气的，大家争取做到因材施教，比如试试下面的“四步消化法”。（以难消化细胞为例），具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍（目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉）。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况把握）。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁 
WTRL1 大鼠肺细胞系
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为３００xg(约１,０００rpm)，５-１０分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含５-１０%DMSO(dimethyl sulfoxide)和９０-９５%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于４°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于４°C ３０~６０分钟→ (-２０°C ３０分钟)→-８０°C １６~１８小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降１-３°C至–８０°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-２０°C不可超过１小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-８０°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为１x１０(６)cells/ml vial，融合瘤细胞则以５x１０(６)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
OCI-Ly18细胞系相关产品：HCC9724细胞、C-643细胞、LoVo细胞 
HS 683T细胞系相关产品：NCI-H522细胞、U266细胞、3T3-Swiss细胞 
L5178Y TK+/- (clone 3.7.2C)细胞系相关产品：ECC-12细胞、HCC2108细胞、CHP 100细胞 
Be-Wo细胞系相关产品：BC-022细胞、SIRC细胞、3T3(A31)细胞 
RSC 96细胞系相关产品：Ej138细胞、SKMEL-31细胞、IEC 18细胞 
HL-1细胞系相关产品：HK-2 [Human kidney]细胞、H1792细胞、OCI-Ly7细胞 
COLO 394细胞系相关产品：HRPEpiC细胞、NPC-TW-039细胞、MHCC 97-L细胞 
4T1-A细胞系相关产品：KU-812细胞、IMR 90细胞、OVCA5细胞 
CAL-33细胞系相关产品：COLO 678细胞、WM451细胞、hTERT-HPNE细胞 
Oka-C1细胞系相关产品：H-719细胞、NCI-H322细胞、HHFK细胞 
C3H/10T1/2 clone 8细胞系相关产品：TE 32细胞、PIG1细胞、RPMI-8402细胞 
16HBE140细胞系相关产品：NCI-SNU-475细胞、LCLC-103H细胞、BTI-TN5B1-4细胞 
DLD-1细胞系相关产品：HCC1419细胞、BGC-823细胞、LS1034细胞 
H-1793细胞系相关产品：ECC-10细胞、Swiss 3T6细胞、SCC-25细胞 
NCI-H1435细胞系相关产品：Rat-1细胞、MHCC97L细胞、NCI-H1668细胞 
SNU-C2A细胞系相关产品：AAV293细胞、SNU-354细胞、SNU-5细胞 
SNU-C2A细胞系相关产品：AAV293细胞、SNU-354细胞、SNU-5细胞 
MC3T3E1细胞系相关产品：Panc10.05细胞、RH7777细胞、UT7细胞 
STC-1细胞系相关产品：Tu-686细胞、P3-NS1/1Ag 4.1细胞、NIH/3T3细胞 
H-596细胞系相关产品：H-661细胞、CAL62细胞、Tb1Lu细胞 
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H-747细胞系相关产品：HPC-Y5细胞、H727细胞、VMRC-LCD细胞 
H69细胞系相关产品：KYSE-50细胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-4细胞、PG [Human lung carcinoma]细胞 
B16-BL6细胞系相关产品：C6661细胞、COLO 357细胞、HLEC-B3细胞 
L540细胞系相关产品：MES-SA/Dx5细胞、P31 FUJ细胞、RS(4;11)细胞 
Sp2/O细胞系相关产品：X63-AG 8.653细胞、OUMS-23细胞、SCC4细胞 
P31-FUJ细胞系相关产品：801-D细胞、HCT 15细胞、SL-29细胞 
HCC1395细胞系相关产品：COLO-829细胞、3T6细胞、Human Fetal Thymocyte-8810细胞 
PK13细胞系相关产品：MIA PaCa-2细胞、MM1S细胞、BEAS-2B细胞 
HEK-2细胞系相关产品：HCC0366细胞、SUM-102细胞、Namalva细胞 
ARO 81-1细胞系相关产品：FHCRC-11细胞、MV-3细胞、CNE-2Z细胞 
MS1细胞系相关产品：H1522细胞、MS-751细胞、YES-2细胞 
Neuro-2a细胞系相关产品：HBSMC细胞、IOSE80细胞、Madin Darby Bovine Kidney细胞 
RPE D407细胞系相关产品：WM115F细胞、MGHU3细胞、SW-480细胞 
Panc327细胞系相关产品：KPL-1细胞、BEL-7402细胞、COLO-320HSR细胞 
T-HEECs细胞系相关产品：QBI-HEK 293A细胞、MV4;11细胞、MDA134细胞 
H1395细胞系相关产品：MIO-M1细胞、Hs840_T细胞、Caco2BBe细胞 
Cates 1B细胞系相关产品：KP2细胞、67NR细胞、A549细胞 
JTC-39细胞系相关产品：H460细胞、OS-RC-2细胞、MOLT-4细胞 
Caco2-BBE细胞系相关产品：Hs729细胞、OCI-AML5细胞、Embryonic Bovine Tracheal cells细胞 
COLO320-DM细胞系相关产品：HuO9细胞、RBMEC细胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3细胞 
SW780细胞系相关产品：TOV-21G细胞、EB3 [Human Burkitt lymphoma]细胞、Vero E6细胞 
UACC893细胞系相关产品：H-841细胞、HEK-293FT细胞、CCRF-CEM/S细胞 
HEYA8细胞系相关产品：Hs675T细胞、SJRH30细胞、FET细胞 
KP4细胞系相关产品：NS653细胞、F9细胞、VP229细胞 
751细胞系相关产品：SK-NEP-1细胞、H-1792细胞、RIN-14B细胞 
GM2219C细胞系相关产品：AK细胞、HEK 293-EBNA细胞、Loucy细胞 
SCC154细胞系相关产品：Plaepi 34细胞、VM-CUB1细胞、BHT101细胞 
NCI-H1563细胞系相关产品：HO-8910PM细胞、U87MG细胞、FHCRC-11细胞 
NCIH2452细胞系相关产品：B-3细胞、NMCG1细胞、HPMEC细胞 
STO细胞系相关产品：NCIH1092细胞、WEHI3B细胞、H-146细胞 
NBL-2细胞系相关产品：NPC-039细胞、Farage Original Line细胞、EFM192B细胞 
HCCC9810细胞系相关产品：Hs 840.T细胞、MEL细胞、Human Lung Microvascular Endothelial Cell line-5a细胞 
NOZAWA细胞系相关产品：ME180细胞、NCI-SNU-878细胞、HepaRG细胞 
COS-7细胞系相关产品：U-87MG细胞、HS-695T细胞、TE-9细胞 
MC-CAR细胞系相关产品：NSH细胞、SKLU1细胞、BE2M17细胞 
H-1688细胞系相关产品：MDA330细胞、LLC-PK-1细胞、Moorfields/Institute of Ophthalmology-Muller 1细胞 
NCI-H1573细胞系相关产品：CCD19-Lu细胞、CNE1-LUC细胞、Scott细胞 
NCI.H460细胞系相关产品：THP-1(ATCC)细胞、P3J HR-1细胞、NS-I/1细胞 
Hs742T细胞系相关产品：Colo741细胞、CEM-C7细胞、SUM190PT细胞 
IPLB-Sf21AE细胞系相关产品：NCI-H378细胞、NCI-SNU-520细胞、hFOB细胞 
MOLM-13细胞系相关产品：NCI N87细胞、Sol8细胞、WEHI3B细胞 
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3T3细胞系相关产品：Me-Wo细胞、WERIRb1细胞、Line 207细胞 
M 1细胞系相关产品：32D.cl3细胞、NCIH187细胞、639 V细胞 
Hs888Lu细胞系相关产品：COLO 829细胞、Y79细胞、SUM52PE细胞 
PF382细胞系相关产品：FRTL-5 Cl 2细胞、RWPE1细胞、PC 61 5.3细胞 
RMG-I细胞系相关产品：HMCB细胞、C3H-10T1/2细胞、293T/17细胞 
MC-4细胞系相关产品：SUIT2细胞、PTK-2细胞、CAL-85-1细胞 
Bronchial Epithelium transformed with Ad12-SV40 2B细胞系相关产品：QBC(939)细胞、JB 6细胞、HIT T15细胞 
T-ALL1细胞系相关产品：RS(4;11)细胞、HFE-145细胞、SKMel-5细胞 
TCC-SUP细胞系相关产品：NTERA-2/D1细胞、COLO824细胞、SK-RC-20细胞 
TSU-Pr1细胞系相关产品：H1568细胞、CMT 93细胞、HME-1细胞 
Lewis-Lung细胞系相关产品：NCIH187细胞、UM-UC-3细胞、MGSMC细胞 
L5178-R细胞系相关产品：Karpas-299细胞、NIH:OVCAR-4细胞、SRS-82细胞 
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