SK-N-BE(2)-C 人神经母细胞瘤细胞系

"SK-N-BE(2)-C 人神经母细胞瘤细胞系
细胞背景资料：神经母细胞瘤；骨髓转移；男性 
细胞形态：上皮细胞样 
细胞传代培养的胰酶消化法：传代培养：是指细胞从一个培养瓶以１：２或１：２以上的比例转移，接种到另一培养瓶的培养。传代细胞，可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代，部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。实验步骤：①入无菌室之前用肥皂洗手，再用７５% 的酒精擦拭消毒双手；②倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液３７℃下预热；③超净台台面应整洁，用７５%酒精棉球擦拭清洁；④打开超净工作台的紫外灯照射台面２０min左右，关闭紫外灯，打开风机清洁空气除去臭氧；⑤点燃酒精灯;取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内；⑥将培养用液瓶口用７５%酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上；⑦倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用２-３ml Hanks液洗去残留的就培养基，或用少量胰酶涮洗一下；⑧每个大培养瓶加入１ml胰酶，小培养瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察。当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中；⑨加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(７-１０ml/大瓶;３-５ml/小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。盖好瓶盖，适度拧紧后稍回转，以利于CO２的进入，将培养瓶放回CO２培养箱；⑩对悬浮培养细胞，步骤７-９不做。直接将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
SK-N-BE(2)-C 人神经母细胞瘤细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
冻存和复苏的原则：慢冻快融》当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序：采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时，1~2℃/min；当温度达-25℃以下时，5~10℃/min；当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中。2.简易程序：将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1~2℃的速度，在40min内降至液氮表面过夜，次晨投人液氮中。3.传统程序：冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时（或隔夜）→液氮槽长期储存。细胞冻存方法：1.预先配制冻存液》（1）8%DMSO+细胞生长液（92%血清）2.取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×10(6)~5×10(6)细胞/ml）。3.加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法：1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1分钟内全部融化（不要超过3分钟）。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养，24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液，以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂特别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁 
SK-N-BE(2)-C 人神经母细胞瘤细胞系
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
H510A细胞系相关产品：DHL-5细胞、PLB 985细胞、COLO-741细胞 
P3-X63-Ag 8.653细胞系相关产品：NCIH1618细胞、NBLS细胞、TGW细胞 
CALU1细胞系相关产品：LUDLU1细胞、NCI-HUT-69细胞、H1770细胞 
SVEC4-10细胞系相关产品：Hx147细胞、CORL88细胞、Hs 729.T细胞 
H660细胞系相关产品：TE5细胞、MC3T3-E1(C4)细胞、UPCI-SCC-90细胞 
Sun Yat-sen university Ophtalmic center-Retinoblastoma 50细胞系相关产品：Hs822T细胞、SNU-449细胞、U266 B1细胞 
IR 983F细胞系相关产品：MDA-MB-231 #4175细胞、Detroit-562细胞、HCT GEO细胞 
NCI-H102细胞系相关产品：KHYG1细胞、B/C3T3细胞、WIL2 S细胞 
PL9细胞系相关产品：Centre Antoine Lacassagne-78细胞、CAKI1细胞、MDA-MB-231-GFP细胞 
NCI-H1092细胞系相关产品：RPMI 2650细胞、COR-L105细胞、KOSC-2细胞 
D 407细胞系相关产品：HCT 15细胞、293 HEK细胞、ECC12细胞 
H460细胞系相关产品：Karpas 299细胞、87MG细胞、MA 104细胞 
BT 325细胞系相关产品：BCaP-37细胞、KNS-62细胞、DU-4475细胞 
NCI-H87细胞系相关产品：7404细胞、RH-35细胞、COLO824细胞 
OCI-Ly 19细胞系相关产品：SK-HEP-1细胞、UCLA RO-81-A-1细胞、J 82细胞 
P30/0HK细胞系相关产品：UMUC3细胞、H2107细胞、293 Ad5细胞 
P30/0HK细胞系相关产品：UMUC3细胞、H2107细胞、293 Ad5细胞 
Walker 256细胞系相关产品：Centre Antoine Lacassagne-85-1细胞、GBC-SD细胞、BHP 10-3细胞 
H1838细胞系相关产品：DCS细胞、P3.NS-1/1.Ag4.1细胞、MDAMB157细胞 
NCIH250细胞系相关产品：NCIH322细胞、8305-C细胞、SNU-761细胞 
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HEL 299细胞系相关产品：H2085细胞、MM.1S细胞、L-5178-Y细胞 
Hs 888.T细胞系相关产品：SPDC-CCL141细胞、LC-MS细胞、TCC-PAN2细胞 
H-716细胞系相关产品：CHL-IU细胞、KYSE140细胞、MGH-U3细胞 
H358细胞系相关产品：P3/NS1/1-Ag4.1细胞、NK-92 transfected with MFG-hIL2细胞、ACC-2细胞 
H125细胞系相关产品：MOLM16细胞、LLC-WRC 256细胞、RPPVEC细胞 
C666-1细胞系相关产品：AM细胞、WI-38细胞、AU-Mel细胞 
MDA-PCa-2b细胞系相关产品：H-2110细胞、HT144mel细胞、MLMEC细胞 
Normal Rat Kidney-52E细胞系相关产品：U-138-MG细胞、MDA-MB157细胞、Wayne State University-Head and Neck 13细胞 
MV 4;11细胞系相关产品：KYSE 140细胞、CV-1.K细胞、RAW2647细胞 
Shadyside Hospital Pittsburgh-77细胞系相关产品：H9c2 (2-1)细胞、R1800[RA]细胞、M059K细胞 
CAL-39细胞系相关产品：B16 subline B78细胞、EA.hy 926细胞、MC-3T3-E1细胞 
RAW 264.7细胞系相关产品：NCI-H2172细胞、MFM-223细胞、SK-GT-4细胞 
H-1930细胞系相关产品：PaCa2细胞、HS-294-T细胞、253J-BV细胞 
Mel RM细胞系相关产品：MFC细胞、HEK-293-F细胞、H2135细胞 
VMRCLCD细胞系相关产品：L-5178-Y-R细胞、PaTu-8988s细胞、Astrocyte type I clone细胞 
Huh 7.5细胞系相关产品：MiaPaCa2细胞、Lewis Lung Cancer细胞、SUM 190细胞 
MB49细胞系相关产品：HOC细胞、SF-763细胞、Mhh-Call 2细胞 
OCI-Ly07细胞系相关产品：MDA-175细胞、Nthy-ori 3-1细胞、U118MG细胞 
HLE-B3细胞系相关产品：2PK-3细胞、HTSMC细胞、RPE-hTERT细胞 
SW 756细胞系相关产品：G422细胞、RBL-1细胞、CCD 966SK细胞 
QG56细胞系相关产品：EVSA/T细胞、U-343MG细胞、Neuro2a细胞 
GDM-1细胞系相关产品：MCF7-GFP细胞、B16 melanoma F10细胞、UWB1289细胞 
ARO81细胞系相关产品：SN12C细胞、Y3-Ag1,2,3细胞、Baby Hamster Kidney from litter No. 21细胞 
IOSE29细胞系相关产品：C32r细胞、SCC7细胞、CORL26细胞 
16HBE细胞系相关产品：MC38细胞、RASMC细胞、SNB.19细胞 
U-CH1细胞系相关产品：CAL33细胞、Rin-M-5F细胞、CT26WT细胞 
A549/DDP细胞系相关产品：NCI-H2029细胞、SW 948细胞、COLO320 DM细胞 
H-1435细胞系相关产品：YD15细胞、H-2135细胞、OCI/AML2细胞 
KLM1细胞系相关产品：EU-4细胞、ESC-410细胞、NCIH2110细胞 
UM-UC14细胞系相关产品：NCIH510细胞、OVCAR 8细胞、Psi2-DAP细胞 
CCRF-CEM细胞系相关产品：SNU-601细胞、ZR-75-1细胞、OCLY8细胞 
NCI-322细胞系相关产品：H-2171细胞、H226细胞、NCI-H460细胞 
B16 melanoma细胞系相关产品：As-PC1细胞、End1/E6E7细胞、H889细胞 
HFTF细胞系相关产品：HeLa细胞、AX-Mel细胞、NCIH1048细胞 
Sp2/mIL-6细胞系相关产品：MDAPCa2b细胞、WM239A细胞、UCLA RO-81-A-1细胞 
TFH细胞系相关产品：RAW 264.7细胞、NU-GC-2细胞、OCILY-10细胞 
TFH细胞系相关产品：RAW 264.7细胞、NU-GC-2细胞、OCILY-10细胞 
HEK293EBNA细胞系相关产品：OACP4 C细胞、NCIH2110细胞、3AA细胞 
HARA-B细胞系相关产品：HUCCT1细胞、MARC145细胞、DR2R1610细胞 
HGE细胞系相关产品：Hs343T细胞、ECGI10细胞、A-2058细胞 
IGROV 1细胞系相关产品：HDF-a细胞、NCI-Hut 125细胞、OLN-93细胞 
SK-N-BE(2)-C 人神经母细胞瘤细胞系
REC1细胞系相关产品：MKN-7细胞、HEMCSS细胞、CEM clone 7细胞 
IALM细胞系相关产品：DMS273细胞、COS7细胞、C28/I2细胞 
H-889细胞系相关产品：NCI-H1930细胞、NS-I/1细胞、SCL-1细胞 
H647ell细胞系相关产品：SMMC-7721细胞、C3H10T1/2细胞、OCIAML4细胞 
M14-MEL细胞系相关产品：MDA-MB 361细胞、SW982细胞、CCD-966SK细胞 
Human Fetal Thymocyte-8810细胞系相关产品：HCC-1569细胞、H-69细胞、KATO III细胞 
HB 611细胞系相关产品：RPMI #1846细胞、CAL12T细胞、H2405细胞 
ETCC007细胞系相关产品：VP303细胞、Panc 08.13细胞、RCS细胞 
KTC-1细胞系相关产品：RPMI 8226细胞、UMC11细胞、A 375细胞 
Vero-76细胞系相关产品：Jurkat Clone E6-1细胞、HCC-78细胞、SKO007细胞 
MH-S细胞系相关产品：Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-1细胞、NCI-H2452细胞、COLO 320DM细胞 
CALU1细胞系相关产品：LUDLU1细胞、LS-513细胞、COLO320/DM细胞 
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