HHUA 人子宫内膜癌细胞系

"HHUA 人子宫内膜癌细胞系
细胞背景资料：子宫内膜癌；女性 
细胞形态：上皮细胞样 
培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-１９６℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。【冻存细胞】１)选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前１d换液；２)按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达５×１０／ml左右密度，离心，去上清；３)加入配制好的冻存液(培养液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂１０％二甲基亚砜(DMSO)或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外；４)分装于无菌冻存管中，每管加１.５m悬液；５)旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做好标记；６)冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min时间内，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。【复苏细胞】１)从罐中取出冻存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不时摇动，使其急速融化，３０～６０s内完成；３)冻存管用７０％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加１０ml培养液；４)低速离心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培养液洗一次；５)用培养液适当稀释后，装入培养瓶３７℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分，密度应达到１０／ml，在融后稀释２０倍时，仍能保持５×１０／ml数量。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
HHUA 人子宫内膜癌细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气的，大家争取做到因材施教，比如试试下面的“四步消化法”。（以难消化细胞为例），具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍（目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉）。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况把握）。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁 
HHUA 人子宫内膜癌细胞系
因为细胞生长的时候肯定是要相互联系，大部分的细胞都是要成片生长的，尤其是对于贴壁细胞，单个细胞贴壁之后长着长着就长到一片去了。但是如果是成片的细胞抱团的话，传代后细胞是不能贴壁的，这样抱团的细胞就会死亡。所以，消化传代的时候一定要将细胞消化成单个单个的独立状态，这个啊是非常考究你的功夫的！细胞一旦脱落入悬液里你很难再将他吹打成单个，因为他没有受力点了。很难找到受力点让你对他吹打的力分散开细胞。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，受力点就是细胞贴壁的地方。这样你就必须要严格控制好消化的程度啊，这和大师做饭掌握好火候是一样的道理啊。既要消化到容易吹打下来，又不能太过，一吹就整片脱落，要单个单个地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是为了保证不同生长状态贴壁程度的细胞能够都维持在好的受力点分散开。这个是很重要的一点。尤其是对于某些细胞这一点就是他活去死的致命点。像Caco-２细胞就是如此。另外关于传代很重要一点就是一定不能等到细胞长满的时候才去消化传代。要在细胞长到７０%左右的时候就要传代了，一旦发现细胞生长中已经有叠层生长的时候就要立即进行消化传代。不能再拖了。关于换液传代时候洗瓶的问题。对于用DMEM培养基培养的细胞，你在洗的时候如果是用无血清１６４０去洗细胞在随即后的几次中会比用DMEM洗的长的要好。同样，用１６４０培养的也有这个现象。如果不嫌麻烦的话，可以用PBS来洗，洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的，对于有些细胞会更胜一筹。洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清，防止它对胰酶的影响。这样能够保证胰酶的消化能力优先，是很关键的一点。先补充这么多，还会后续更新。再补充一点：传代时PBS洗是很重要的一步，最近发现，用PBS就可以把细胞消化开来。加入PBS放置１０-１５分钟，有些需要更长的时间，等到细胞一个个分离开来的时候，就可以直接吹打下来，但是和胰酶消化一样，要控制好时间，不能时间太过了，要不然损伤细胞，细胞不容易成活，状态容易不好。这个方法对于某些细胞是很管用的。有些细胞用胰酶消化不容易消化成单个的时候，或者临时没有胰酶了，可以选用此方法。不过一定要试试，看是否适合你的细胞。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
NCI-H1238细胞系相关产品：NCI-H1668细胞、BAC1.2F5细胞、SKMEL-31细胞 
SNU-251细胞系相关产品：NSC-34细胞、751-NA-15细胞、CPA 47细胞 
H-1417细胞系相关产品：CFPAC1细胞、NCIH1581细胞、KOSC-2 cl3-43细胞 
H.Ep.-2细胞系相关产品：SNU-886细胞、PLA802细胞、BT-B细胞 
HR-1细胞系相关产品：HEK293F细胞、Walker-256-TC细胞、SNU638细胞 
Jurkat E6-1细胞系相关产品：CLL-CII细胞、Colon-26细胞、HB 611细胞 
CL 1-0细胞系相关产品：HFT-8810细胞、U373-MG细胞、NCI-H292细胞 
KOSC2细胞系相关产品：TALL-104细胞、SU-DHL2细胞、HGF-1细胞 
B35细胞系相关产品：HT-3细胞、NCI-H1688细胞、MeT-5A细胞 
MD Anderson-Metastatic Breast-330细胞系相关产品：RINm-5F细胞、3T3-Swiss albino细胞、EBC1细胞 
MD Anderson-Metastatic Breast-231细胞系相关产品：95D细胞、Hs 940.T细胞、UACC812细胞 
HCA 7细胞系相关产品：H-292细胞、GC1-SPG细胞、AR4-IP细胞 
786-O细胞系相关产品：P-19细胞、Y3M细胞、KU812-F细胞 
RCK8细胞系相关产品：HCC-1954BL细胞、NCI H929细胞、C3H 10T1/2细胞 
NCIH23细胞系相关产品：mIMCD-3细胞、SUPM2细胞、U-118-MG细胞 
NCI-H1373细胞系相关产品：HLMVEC细胞、Colon 38细胞、RIN Cl-5F细胞 
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TKB1细胞系相关产品：Anip[973]细胞、GM05862细胞、NCI-H1694细胞 
Loucy细胞系相关产品：Hep G2/C3A细胞、Mc Ardle 7777细胞、Hs294T细胞 
Hs 706.T细胞系相关产品：NUGC4细胞、HCC1438细胞、HCC-1599细胞 
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HT 1376.T细胞系相关产品：U138细胞、hADSCs细胞、OVCA432细胞 
Duck embryo细胞系相关产品：ECC12细胞、SCLC21H细胞、Sp 2817细胞 
FHCRC-11细胞系相关产品：Metastatic Variant-522细胞、SupT1细胞、NCI-H2227细胞 
3396细胞系相关产品：MDA MB 361细胞、Panc 05.04细胞、PC-3M-2B4细胞 
AX-Mel细胞系相关产品：TCMK-1细胞、OCUM-1细胞、AE 1201细胞 
NCI H747细胞系相关产品：NKL细胞、HeLa-S3细胞、Colon 26细胞 
HCT FET细胞系相关产品：NBLAN5T细胞、MDCK supertube细胞、HO1-N-1细胞 
H1238细胞系相关产品：Dysplastic Oral Keratinocyte细胞、PC-3M-IE8细胞、A549-Taxol细胞 
Hep3B细胞系相关产品：P3J-HR-1细胞、OCI-AML3细胞、IPI-2I细胞 
NCIH847细胞系相关产品：SUPM2细胞、Pa16C细胞、H23细胞 
SK-N-BE(2C)细胞系相关产品：MOLP8细胞、INS1E细胞、LM2-4175细胞 
T98细胞系相关产品：SUPB-15细胞、CF PAC-1细胞、MV-4-11细胞 
XWLC-05细胞系相关产品：H1770细胞、V79-1细胞、Hela-mock细胞 
J774 A1细胞系相关产品：Hs 895.T细胞、C-26细胞、OCIAML3细胞 
SNU601细胞系相关产品：KYSE0030细胞、WiDr-TC细胞、KPNRTBM1细胞 
L 428细胞系相关产品：SNU475细胞、HCC-1833细胞、QGP1细胞 
786O细胞系相关产品：OCI-Ly 1细胞、NCI/ADR-RES细胞、NCI-H441-4细胞 
GP2-293细胞系相关产品：AM38细胞、COLO320-DM细胞、NCI-H1944细胞 
L23/P细胞系相关产品：ETCC007细胞、Mink细胞、Primary Liver Carcinoma/Poliomyelitis Research Foundation/5细胞 
Hu-P-T4细胞系相关产品：COV362细胞、697细胞、Menschliche Und Tierische Zellkulture-3细胞 
NCIH2291细胞系相关产品：Mouse Colon 38细胞、WB F344细胞、KE37细胞 
Hs 27细胞系相关产品：TE-13细胞、A101D细胞、HEP-3B2细胞 
HOS TE 85细胞系相关产品：293AD细胞、LI7细胞、MOVAS-1细胞 
B16 melanoma F10细胞系相关产品：NCIH69细胞、OKT3细胞、EFO-27细胞 
HL7702细胞系相关产品：HPAFII细胞、MCAEC细胞、H-1373细胞 
JEG3细胞系相关产品：L428细胞、CCRF-CEM C1细胞、HuO9细胞 
CAL-85-1细胞系相关产品：SW837细胞、WIL2 Secreting细胞、NCI-H1688细胞 
TEV-1细胞系相关产品：4175细胞、Pan02细胞、Normal fibroblast-10细胞 
P3HR1细胞系相关产品：SNU119细胞、KYSE 450细胞、Clone 166细胞 
L-6细胞系相关产品：L02细胞、ATN-1细胞、HOS-143B细胞 
GM00346细胞系相关产品：Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-3细胞、BT474细胞、HFL-1细胞 
MDA-MB-435 S细胞系相关产品：MDA231-LM2细胞、DHL6细胞、INS1E细胞 
NCI-H378细胞系相关产品：WRL-68细胞、RC-4B细胞、KHYG细胞 
NCI-H165细胞系相关产品：H69C细胞、MC-4细胞、HPF细胞 
GM04154细胞系相关产品：NE-1细胞、PC9细胞、CEL细胞 
D-283细胞系相关产品：NP69细胞、NCIH2023细胞、Vero-E6细胞 
H-1915细胞系相关产品：S180细胞、NPC-TW039细胞、Pt-K2细胞 
HPAF/CD18细胞系相关产品：MUS-M1细胞、PANC 813细胞、BSC-40细胞 
SUM-159PT细胞系相关产品：Hs683细胞、OCI-LY-3细胞、LC2/Ad细胞 
RPMI7951细胞系相关产品：SK-N-BE(2)-C细胞、HT144细胞、TGW-nu细胞 
EBNA293细胞系相关产品：HSC-I细胞、OV-1063细胞、MiaPaCa2细胞 
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HS578细胞系相关产品：CAMA-1细胞、SCCVII/St细胞、MT-3 [Human leukocytes]细胞 
Vero-76细胞系相关产品：Jurkat Clone E6-1细胞、KMS26细胞、NCIH1694细胞 
Cates-1B细胞系相关产品：BHK 21细胞、AAV-293细胞、DC 2.4细胞 
Walker-256细胞系相关产品：AR4-IP细胞、HCC0366细胞、HEL-92_1_7细胞 
TSCC1细胞系相关产品：SW-756细胞、M4e细胞、HuP-T4细胞 
SK-RC 52细胞系相关产品：BLO11细胞、McCoy细胞、Vertebral Cancer of the Prostate细胞 
118MG细胞系相关产品：SUP-B1细胞、Detroit 562细胞、LM1细胞 
HANK1细胞系相关产品：MCA-38细胞、H-1781细胞、NCI-H322细胞 
C-8161细胞系相关产品：PLB-985细胞、BS-C-1细胞、SNU-423细胞 
SUDHL16细胞系相关产品：NK92-MI细胞、RT-112细胞、AE1201细胞 
UCH-1细胞系相关产品：RCC10RGB细胞、RKO-AS45-1细胞、H-1793细胞 
H-1404细胞系相关产品：RPMI.8226细胞、HL7702细胞、Vero-76细胞 
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