NH-6 人肾上腺神经母细胞瘤细胞系

"NH-6 人肾上腺神经母细胞瘤细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍 
细胞形态：上皮细胞样 
【细胞培养中原虫的污染情况总结】原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中(不加细胞)，３７度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长就是操作的问题。也可以在培养基中事先加入双抗(酸链霉素和苄青霉素)。但双抗有时会影响细胞的状态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。１)孵箱应定期用三氧机消毒或者紫外光照射，并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水；２)超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素；３)超净台的风机不能过大，风机到６-８格。否则也可能能致霉菌污染；４)无菌室经甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的喷洒中和，约几小时即可进入操作。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
NH-6 人肾上腺神经母细胞瘤细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
细胞培养过程中，总是会出现各种意想不到的问题，一不留神就会全盘皆输。所谓细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋。下面是贴壁细胞的保藏方法，希望对细胞培养初学操作者有所帮助：1)观察细胞状态：贴壁细胞密度达到85-90%，即可以细胞冻存形式进行保藏，拍照，记录细胞状态；2)细胞清洗：培养皿表面消毒后，转移至生物安全柜中，去除培养皿中培养液，加入12mlPBS，轻轻摇晃培养皿清洗细胞，随后吸除PBS清洗液；3)细胞消化：将2ml胰酶加入培养皿中，完全覆盖细胞，置于显微镜下观察（期间禁止摇晃培养皿），当细胞刚开始脱落时，立即转移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余约0.5ml胰酶，转移至培养箱内继续消化，每30秒肉眼观察细胞状态，至细胞成流沙状完全脱落，转移至生物安全柜中，加入12ml完全培养基，终止消化；4)细胞离心：将终止消化后的细胞悬液吹打均匀，吸取至15ml离心管中，1000r/min（110g），离心3min；5)细胞冻存：离心后去除细胞上清液，按照冻存细胞量5*10^5/ml，吸取冻存液重悬细胞沉淀，吹打均匀后分装至相应的冻存管中，进行冻存；6)细胞保藏：冻存管做好标记，放至程序降温盒中，于4℃冰箱放置30min，转移至-80℃超低温冰箱过夜，将过夜后的冻存细胞转移至液氮中保藏。 
细胞传代方法：１：２传代；每周换液２-３次 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁生长 
NH-6 人肾上腺神经母细胞瘤细胞系
细胞传代培养(消化法)标准操作规程【原理】细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。【材料和试剂】１)无菌生理缓冲液(PBS)；２)胰酶-EDTA溶液(０.０５%胰酶-０.５３mM EDTA-４Na): 以１０ml分装于１５ ml无菌离心管中，保存于–２０℃，使用前放在３７℃水槽回温；３)新鲜培养基；４)无菌吸管/离心管/培养瓶【传代前准备操作】１)预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入３７℃水浴锅内预热；２)用７５％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手；３)正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染；４)点燃酒精灯：注意火焰不能太小；５)准备好将要使用的消毒后的空培养瓶；６)取出预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内；７)从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞；８)打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。 
细胞形态特性：成纤维细胞 
MDA-415细胞系相关产品：HUVEC细胞、Mouse INsulinoma 6细胞、C22 (Clara)细胞 
SW-1417细胞系相关产品：Jurkat FHCRC细胞、NCI-H889细胞、JURKAT E-6.1细胞 
HL-60 Clone 15细胞系相关产品：HHUA细胞、Roswell Park Memorial Institute 7666细胞、TE-6细胞 
Caco-2/BBe细胞系相关产品：TB-1 Lu细胞、NB4细胞、TE 671细胞 
Mel-624细胞系相关产品：CCK81细胞、OCI-Ly8细胞、KYSE-30细胞 
CCRF.CEM细胞系相关产品：OCIAML2细胞、SUDHL-16细胞、Hs 688(A).T细胞 
MC-38细胞系相关产品：OE-21细胞、SUDHL8细胞、HeLa S3细胞 
CP70细胞系相关产品：HUTU80细胞、HEL-92-1-7细胞、NCI-N87细胞 
HFT 8810细胞系相关产品：CAL-85-1细胞、MPC 11细胞、HEC-151细胞 
SKNBE(1)细胞系相关产品：WERI-Rb 1细胞、HCC-1588细胞、NBL_S细胞 
P19细胞系相关产品：KYSE140细胞、LN-18细胞、L 363细胞 
WM-239-A细胞系相关产品：Daudi细胞、Jurkat (clone E6-1)细胞、MKN-28细胞 
H-810细胞系相关产品：SKRC-42细胞、COLO-320DM细胞、H 9细胞 
SKRC 39细胞系相关产品：JM1细胞、HOCF细胞、NCI H69细胞 
Vero细胞系相关产品：H3255细胞、A-375SM细胞、32D.3细胞 
HS-5细胞系相关产品：HEK293-F细胞、HEK293细胞、TN5B14细胞 
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32Dcl3细胞系相关产品：NIH3T3细胞、A 2780 CP细胞、WPMY-1细胞 
B16 melanoma细胞系相关产品：As-PC1细胞、End1/E6E7细胞、H889细胞 
C-33-A细胞系相关产品：PVEC细胞、293c18细胞、NCI-H2107细胞 
NH-6 人肾上腺神经母细胞瘤细胞系
CV-1.K细胞系相关产品：OVMANA细胞、Ku812F细胞、RH8994细胞 
COR-L26细胞系相关产品：EJ 138细胞、Psi2 DAP细胞、JB-6细胞 
NCI H295R细胞系相关产品：NCI-H1092细胞、RERFLCMS细胞、SUIT2细胞 
HPB-ALL细胞系相关产品：Eca 109细胞、H3396细胞、PCI-4.2细胞 
EB3 [Human Burkitt lymphoma]细胞系相关产品：Okayama University Medical School-27细胞、H929细胞、SW480E细胞 
RIN-m5F细胞系相关产品：NCIN87细胞、CCC-HHM-2细胞、639V细胞 
U-2OS细胞系相关产品：RT 112细胞、OLN93细胞、NS653细胞 
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SKCO1细胞系相关产品：PC3M-1E8细胞、NG108-15细胞、RBVEC细胞 
GM-3573细胞系相关产品：CCD18细胞、COLO-394细胞、CCRF-CEM C7细胞 
NCI-H2342细胞系相关产品：174xCEM.T2细胞、NCIH889细胞、hEEC细胞 
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NH-6 人肾上腺神经母细胞瘤细胞系
RMG-1细胞系相关产品：V79-GalK1细胞、LOU-NH-91细胞、OSC-19细胞 
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