AsPC-1 人胰腺癌细胞系

"AsPC-1 人胰腺癌细胞系
细胞背景资料：该细胞来源于人胰腺癌裸鼠异种移植产生的癌性腹水，可以表达CEA，人胰腺相关抗原、人胰腺特异性抗原和黏蛋白。 
细胞形态：上皮细胞样 
传代培养及其操作步骤：原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。传代细胞形成细胞株的利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。【操作步骤】１)吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液；２)向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜；３)置３７℃孵箱或室温(２５℃温度)下进行消化，２~５min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化；４)吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培养液，终止消化；５)使用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞；６)用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO２培养箱中进行培养；７)细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般２～３d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面，即可使用；也可继续传代扩大培养或换成维持液。【注意事项】１)掌握好细胞消化的时间，消化时间过短时，细胞不宜从瓶壁脱落，过长的消化会导致细胞脱落、损伤；２)掌握好消化浓度，当消化液浓度过高时，消化时间应缩短，过低时细胞消化时间相对延长。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
AsPC-1 人胰腺癌细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
悬浮细胞不容易转染：悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍，所以，脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。其次，脂质体试剂的毒性较大，这就使得悬浮细胞的转染更为困难了。另外，悬浮细胞不易培养，易死亡，也给细胞转染造成了一定的困难。为了提高悬浮细胞的转染效率，可以使用非脂质体的转染试剂，如纳米材料的。也可以使用电转染方法，针对悬浮细胞等难转染细胞还是挺不错的，电击对细胞有一定的损伤，选用具有细胞膜修复功能的电转染试剂，可以将电击对细胞的伤害降到最低，悬浮细胞不易转染，选对试剂及良好的细胞培养环境才是关键。 
细胞传代方法：１：３-１：６传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁生长 
AsPC-1 人胰腺癌细胞系
细胞传代培养(消化法)标准操作规程【原理】细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。【材料和试剂】１)无菌生理缓冲液(PBS)；２)胰酶-EDTA溶液(０.０５%胰酶-０.５３mM EDTA-４Na): 以１０ml分装于１５ ml无菌离心管中，保存于–２０℃，使用前放在３７℃水槽回温；３)新鲜培养基；４)无菌吸管/离心管/培养瓶【传代前准备操作】１)预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入３７℃水浴锅内预热；２)用７５％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手；３)正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染；４)点燃酒精灯：注意火焰不能太小；５)准备好将要使用的消毒后的空培养瓶；６)取出预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内；７)从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞；８)打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。 
细胞形态特性：上皮样 
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AsPC-1 人胰腺癌细胞系
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AsPC-1 人胰腺癌细胞系
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