HK-2 [Human kidney] 人肾小管上皮细胞系

"HK-2 [Human kidney] 人肾小管上皮细胞系
细胞背景资料：该细胞属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-１６ E６/E７基因而获得永生化。将含有HPV-１６ E６/E７基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN １６ E６/E７转染外生包装细胞Psi-２，Psi-２细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA３１７，最后将PA３１７产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN １６ E６/E７中含有新霉素抗性，但未用G４１８筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示HK-２细胞来源于单克隆。PCR检测证实HK-２细胞基因组中含有E６/E７基因。 
细胞形态：上皮细胞样 
【细胞培养中细菌、霉菌的污染情况总结】细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理；霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，３７度孵箱培养２-３天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用酸铜溶液擦拭CO２孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。CO２孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用擦洗孵箱(包括隔板，箱壁)。并把放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁(２月左右)，尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是：用８４液擦洗－清水擦洗－７５%酒精擦洗－紫外灯照。预防霉菌污染，可在培养基里加３u/ml的两性霉素或制霉菌素或D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
HK-2 [Human kidney] 人肾小管上皮细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，客户遇到的问题从细胞生长角度来说，针对细胞培养过程中生长不好、甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞生长不好》可能原因：细胞本身的状态》1)细胞传代次数多，细胞老化；2)细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；3)细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；4)胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未完全分离而成团，细胞死亡；5)细胞的冻存与复苏：慢冻速融。污染：1)支原体污染；2)霉菌污染；培养基或血清：1)更换血清或培养基之前未进行验证；2)选择的培养基是否合适；3)培养基配制是否准确无误；培养环境：1)CO2供应是否正常；2)培养箱或摇床温度控制是否正确；解决方法：根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案》1)注意细胞的本身状态：如传代次数、接种量等；2)避免产生污染（用正规、合法、可溯源的血清）；3)要用合适的血清或培养基，经过验证；4)注意实验室的环境；二、培养细胞死亡》可能原因：1)培养箱内无CO2；2)培养箱内温度波动太大；3)细胞冻存或复苏过程中损伤；4)培养液渗透压不正确；5)培养液中有毒代谢产物堆积；解决方法：1)检测培养箱内CO2；2)检查培养箱内温度；3)取新的保存细胞种；4)检测培养液渗透压；5)换入新鲜培养液。 
细胞传代方法：１：４传代；２-３天换液１次 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁生长 
HK-2 [Human kidney] 人肾小管上皮细胞系
细胞传代培养(消化法)标准操作规程【原理】细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。【材料和试剂】１)无菌生理缓冲液(PBS)；２)胰酶-EDTA溶液(０.０５%胰酶-０.５３mM EDTA-４Na): 以１０ml分装于１５ ml无菌离心管中，保存于–２０℃，使用前放在３７℃水槽回温；３)新鲜培养基；４)无菌吸管/离心管/培养瓶【传代前准备操作】１)预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入３７℃水浴锅内预热；２)用７５％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手；３)正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染；４)点燃酒精灯：注意火焰不能太小；５)准备好将要使用的消毒后的空培养瓶；６)取出预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内；７)从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞；８)打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。 
细胞形态特性：上皮样 
ECC10细胞系相关产品：HCT116细胞、AM-38细胞、UPCISCC090细胞 
PLA801-95C细胞系相关产品：NCI-HUT-292细胞、SK Mel 1细胞、H841细胞 
CD18/HPAF细胞系相关产品：NB-9细胞、RL95-2细胞、Chinese Hamster Lung细胞 
SCCVII/St细胞系相关产品：Panc-327细胞、LNCaP-ATCC细胞、LS 180细胞 
Z-138细胞系相关产品：H838细胞、LNCaP-FGC细胞、D283 Med细胞 
SkChA-1细胞系相关产品：CMT93细胞、Human ErythroLeukemia细胞、H-211细胞 
FL-83B细胞系相关产品：SW954细胞、Hi-5细胞、MDA175细胞 
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Mink细胞系相关产品：ROS 17/28细胞、SUIT2细胞、Human Microglia Clone 3细胞 
SNU638细胞系相关产品：NIH:OVCAR3细胞、SP2-0-Ag14细胞、AD293细胞 
L5178-R细胞系相关产品：Karpas-299细胞、GM3190细胞、P3X63-Ag8.653细胞 
SUM-52PE细胞系相关产品：GM01232E细胞、LLC-PK1细胞、U-226AR1细胞 
IPEC1细胞系相关产品：SKNBE2C细胞、hFOB细胞、Mel526细胞 
H716细胞系相关产品：Colo16细胞、BRL 3A细胞、NCI-H1666细胞 
NCIH345细胞系相关产品：COLO 738细胞、MT4细胞、Jurkat clone A3细胞 
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HOC-1细胞系相关产品：SCC 25细胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3细胞、H-2023细胞 
EU-3细胞系相关产品：PANC0203细胞、Vero 76细胞、DHL-5细胞 
VMM5A细胞系相关产品：CX-1细胞、Fox/NY细胞、7860细胞 
HK-2 [Human kidney] 人肾小管上皮细胞系
BrCL18细胞系相关产品：MUTZ3细胞、SKMEL-2细胞、VK-2/E6E7细胞 
RPMI-8226S细胞系相关产品：RCSMC细胞、C32 mel细胞、HT115细胞 
F81细胞系相关产品：UPCI-SCC-90细胞、Natural Killer-92细胞、BHK21细胞 
H1792细胞系相关产品：IM9细胞、Caco-2BBe细胞、MRC-V细胞 
OACP4C细胞系相关产品：B-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1细胞、EOC 20细胞、NB-4细胞 
LS-411N细胞系相关产品：N-87细胞、H1648细胞、MESSA细胞 
184A1细胞系相关产品：Hep 3B2_1-7细胞、BALB/c 3T3 clone A31细胞、RK13细胞 
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SKMEL3细胞系相关产品：H146细胞、NCI-ADR-RES细胞、COV434细胞 
PaTu-8988s细胞系相关产品：8305-C细胞、EBC-1/original细胞、SCC154细胞 
MCF7/WT细胞系相关产品：MDAMB134VI细胞、MMAc-Serum Free细胞、C26细胞 
PL 5细胞系相关产品：U 266细胞、HT144-mel细胞、D10.G4.1细胞 
Ls-174-T细胞系相关产品：H87细胞、MC-CAR细胞、RMS13细胞 
SK MES 1细胞系相关产品：OVCAR.3细胞、D-283MED细胞、LNCaP C4-2细胞 
BNL-HCC细胞系相关产品：Walker 256细胞、Vero细胞、QGY细胞 
Wills Eye Research Institute-Retinoblastoma-1细胞系相关产品：18G3.cl 1细胞、NCIH226细胞、Pa16C细胞 
293T/17细胞系相关产品：SU-DHL-16细胞、IPEC1细胞、H1693细胞 
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HSC-5 [Human skin squamous cell carcinoma]细胞系相关产品：Y3M细胞、HPAF2细胞、MLM细胞 
TE32细胞系相关产品：NIH-3T3细胞、LC1-Sq细胞、MDA-MB-415细胞 
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MC-3T3细胞系相关产品：CESS细胞、A-172MG细胞、RFL 6细胞 
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Ramos (RA 1)细胞系相关产品：hESC细胞、K7M2 wt细胞、SW-1990细胞 
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FTC133细胞系相关产品：HCC1395细胞、HSAS1细胞、HCA 7细胞 
TGW细胞系相关产品：Clone Y-1细胞、ARO细胞、RCC-JF细胞 
GCT0404细胞系相关产品：HS766T细胞、Roswell Park Memorial Institute 1788细胞、SL1细胞 
CO115细胞系相关产品：SK.MEL.5细胞、PECAPJ34细胞、MADB-106细胞 
SCC7细胞系相关产品：Douglas Foster-1细胞、ASH3细胞、Balb/3T3-4-Cl31细胞 
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RT 112细胞系相关产品：PLC/PRF5细胞、H-2291细胞、KYSE0520细胞 
Karpas299细胞系相关产品：DAN-G细胞、PL-11细胞、MDAPCa2b细胞 
HCC0366细胞系相关产品：MCF/Adr细胞、RN-c细胞、NTC200细胞 
NCI-BL1339细胞系相关产品：Neuro-2a细胞、Tb 1-Lu细胞、NCTC1469细胞 
HK-2 [Human kidney] 人肾小管上皮细胞系
GA-10细胞系相关产品：NIH3T3-L1细胞、HIEC-6细胞、K1细胞 
SCC4细胞系相关产品：COLO 201细胞、SMA 560细胞、Pt K2细胞 
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McA-RH8994细胞系相关产品：LAN1细胞、PL-45细胞、Mel624细胞 
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Panc 02.03细胞系相关产品：HES [Human embryonic skin fibroblast]细胞、VK2/E6E7细胞、CCD-841CoN细胞 
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