JOSK-M Thawing人急性单核细胞白血病细胞系

"JOSK-M Thawing人急性单核细胞白血病细胞系
细胞背景资料：急性单核细胞白血病；男性
细胞形态：淋巴母细胞样
JOSK-M Thawing人急性单核细胞白血病细胞系
细胞生长：悬浮
细胞传代注意事项：①传代培养时注意无菌操作并防止细胞间的交叉污染。所有操作尽量靠近酒精灯火焰。每次只进行一种细胞的操作。每种细胞使用一套器材；②每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代；③如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的BBS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗生素，并经常更换培养基。传代细胞的建系和维持：细胞系的维持通过换液传代再换液、再传代和细胞种子冻存来实现。对每一个细胞系来说都有其自身的特点，要做好建系的维持必须记录好细胞档案,换液传代和做好细胞系的管理工作。培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-１９６℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
冻存和复苏的原则：慢冻快融》当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序：采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时，1~2℃/min；当温度达-25℃以下时，5~10℃/min；当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中。2.简易程序：将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1~2℃的速度，在40min内降至液氮表面过夜，次晨投人液氮中。3.传统程序：冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时（或隔夜）→液氮槽长期储存。细胞冻存方法：1.预先配制冻存液》（1）8%DMSO+细胞生长液（92%血清）2.取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×10(6)~5×10(6)细胞/ml）。3.加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法：1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1分钟内全部融化（不要超过3分钟）。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养，24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液，以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂特别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
JOSK-M Thawing人急性单核细胞白血病细胞系
细胞生长特性：悬浮
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。
细胞形态特性：详见细胞说明书
SKBR-3细胞系相关产品：RPMI 1846细胞、NCIH2085细胞、RT-BM-1细胞
Panc-327细胞系相关产品：HCEC-12细胞、SN12C细胞、SNU-C2B细胞
EVSA/T细胞系相关产品：OCI/AML-5细胞、NCI-H196细胞、A9细胞
KYSE-520细胞系相关产品：Bx-PC3细胞、S180细胞、H35细胞
Tregs细胞系相关产品：Epstein-Barr-3细胞、SCC9细胞、SKNBE2细胞
OE21细胞系相关产品：NCI-H508细胞、ECV304细胞、H64细胞
MDA-MB453细胞系相关产品：CCD966SK细胞、NCI-H1734细胞、NCIH2135细胞
MiaPaCa-2细胞系相关产品：TW-039细胞、FET细胞、Potorous tridactylus Kidney 1细胞
SNU5细胞系相关产品：NCI-SNU-C2B细胞、Hela-Ap-1细胞、HEK 293-EBNA细胞
HBL-100细胞系相关产品：NS-I/1细胞、SKMel-28细胞、Hs27细胞
GM07404A细胞系相关产品：SNU407细胞、HTori-3细胞、CTLL(2)细胞
BEL 7405细胞系相关产品：NCI-H128细胞、D-341细胞、IOSE80UBC细胞
HCEC-B4G12细胞系相关产品：AX-Mel细胞、MNNG细胞、H-1975细胞
MyLa 2059细胞系相关产品：B16 melanoma细胞、KYSE 520细胞、mRTEC细胞
TE15细胞系相关产品：N-Tera-2细胞、X63细胞、RPMI 8226/S细胞
OCI-LY-18细胞系相关产品：ROS17/2.8细胞、P3/NS1/Ag4-1细胞、NG10815细胞
MC-26细胞系相关产品：HCC-1428细胞、C3A细胞、Hs 683细胞
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NOR10细胞系相关产品：NCI-SNU-387细胞、SL-29细胞、UM-UC14细胞
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LA4细胞系相关产品：293/EBNA-1细胞、NS1细胞、T HEECs细胞
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SNK-6细胞系相关产品：Turbot Embryonic Cell line细胞、HepaRG细胞、HL1细胞
JOSK-M Thawing人急性单核细胞白血病细胞系
TE13细胞系相关产品：H1944细胞、GM05372细胞、CT26.CL25细胞
HSC-5 [Human skin squamous cell carcinoma]细胞系相关产品：Y3M细胞、HPAF2细胞、MLM细胞
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HET1A细胞系相关产品：COR-L279细胞、Mv 1 Lu细胞、HAVSMC细胞
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NCIH1299细胞系相关产品：H1650_CO细胞、JS1细胞、Swiss 3T6细胞
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H-1436细胞系相关产品：PNT1/A细胞、SUM-52-PE细胞、Hca-F细胞
HL-1细胞系相关产品：HK-2 [Human kidney]细胞、H1792细胞、OCI-Ly7细胞
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IOSE-80细胞系相关产品：mouse Inner Medullary Collecting Duct-3细胞、LO2细胞、H1781细胞
JOSK-M Thawing人急性单核细胞白血病细胞系
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WSU-DLCL(2)细胞系相关产品：MDCK细胞、V 79-4细胞、HCV 29细胞
RPMI 8402细胞系相关产品：Hs-611-T细胞、AML-2细胞、HT-1197细胞
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JHH-7细胞系相关产品：GM03671细胞、Hs_578t细胞、HBE 135-E6E7细胞
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