EU-4 Thawing人急性髓系白血病细胞系

"EU-4 Thawing人急性髓系白血病细胞系
细胞背景资料：儿童急性髓系白血病
细胞形态：淋巴母细胞样
EU-4 Thawing人急性髓系白血病细胞系
细胞生长：悬浮
细胞培养无菌操作的演示：凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用７５％酒精擦拭瓶子的外表面；靠近酒精灯火焰操作。器皿使用前必须过火灭菌，继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处，使用时仍要过火。各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：自来水刷洗，除去灰尘。烘干、泡：烤箱中烘干，然后再浸入５％稀中１２小时以除去脏物、铅、等物。刷洗、烘干：１２小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干；泡酸、清洗：用清洁液浸泡１２小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗１５次，最后蒸馏水冲洗３-５次和用双蒸水过３次。烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸(油光纸)包装。高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向１５磅时，维持２０-３０分钟。高压消毒后烘干。二、旧的玻璃器皿的洗消：刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液(洗涤剂)的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液(酸液)，１２小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗(避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗)，再用蒸馏水冲洗３次。烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸(油光纸)等包装。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
冻存和复苏的原则：慢冻快融》当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序：采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时，1~2℃/min；当温度达-25℃以下时，5~10℃/min；当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中。2.简易程序：将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1~2℃的速度，在40min内降至液氮表面过夜，次晨投人液氮中。3.传统程序：冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时（或隔夜）→液氮槽长期储存。细胞冻存方法：1.预先配制冻存液》（1）8%DMSO+细胞生长液（92%血清）2.取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×10(6)~5×10(6)细胞/ml）。3.加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法：1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1分钟内全部融化（不要超过3分钟）。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养，24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液，以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂特别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
EU-4 Thawing人急性髓系白血病细胞系
细胞生长特性：悬浮
细胞培养实验相关问题总结：支原体(mycoplasma)污染的细胞，是否能以肉眼观察出异状？不能。除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨之；支原体污染会对细胞培养有何影响？支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数，代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义；侦测出细胞株有支原体污染时，该如何处理？直接灭菌后丢弃，以避免污染其它细胞株；CO２培养箱之水盘如何保持清洁？定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之；为何培养基保存于４°C冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值会越来越偏碱性？培养基保存于４°C冰箱中，培养基内之CO２会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red)的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果，将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤之CO２，以调整pH值；购买之细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可；购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–８０°C太久；收到之冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。
细胞形态特性：详见细胞说明书
AN3 CA细胞系相关产品：BV-2细胞、Ishikawa细胞、COLO 679细胞
HET-1A细胞系相关产品：GM3190细胞、Caco2-BBE细胞、LX-2细胞
NCI-H498细胞系相关产品：RPE1-hTERT细胞、B16 subline B78细胞、22Rv-1细胞
BT20细胞系相关产品：OV-90细胞、MDAMB361细胞、PANC-04-03细胞
Calu-1细胞系相关产品：KYSE-140细胞、BCAP37细胞、NCI-BL2141细胞
T98-G细胞系相关产品：H-28细胞、D341 Med细胞、OV1/P细胞
Panc 10.05细胞系相关产品：U373-MG细胞、CMT-93细胞、SNUC2A细胞
HCC-44细胞系相关产品：NU-GC-2细胞、BLO11细胞、TH1细胞
HA1800细胞系相关产品：HUSMC细胞、SUDHL-10细胞、K7M2-WT细胞
DMS 114细胞系相关产品：MDAMB175VII细胞、BrCL12细胞、Roswell Park Memorial Institute 1846细胞
NCIH1819细胞系相关产品：CW2细胞、SUM52PE细胞、SVEC 4-10细胞
OS-RC-2细胞系相关产品：NUGC2细胞、SF-767细胞、3T6细胞
SW1271细胞系相关产品：BT325细胞、P3X63 AG8-653细胞、3T3L1细胞
THP1细胞系相关产品：HBVP细胞、WM115-mel细胞、MUTZ3细胞
V79-4细胞系相关产品：LAN5细胞、P3HR-1细胞、W133细胞
MC-116细胞系相关产品：SBC3细胞、CATH-a细胞、MFE-296细胞
ACC3细胞系相关产品：SU.86细胞、Detroit562细胞、OC-316细胞
B16F1细胞系相关产品：870细胞、IPLB-Sf21细胞、BALB/3T3 cl. A31细胞
MCF.7细胞系相关产品：SKNEP1细胞、HCEC细胞、AGS细胞
T2细胞系相关产品：HCC-38细胞、Mel-624细胞、Hs-695-T细胞
Karpas422细胞系相关产品：CAL 12细胞、Hepa 1-6细胞、W133细胞
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Y3-Ag1,2,3细胞系相关产品：HO-8910细胞、CD18/HPAF细胞、LLC-MK2细胞
bEnd.3[BEND3]细胞系相关产品：H1819细胞、FL83B细胞、BC3 H1细胞
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HEM-L细胞系相关产品：Z310细胞、SU.86.86细胞、ECC-12细胞
EU-4 Thawing人急性髓系白血病细胞系
HBE 135-E6E7细胞系相关产品：SaOS细胞、HPAEpiC细胞、Clone 929细胞
Clone Y1细胞系相关产品：COR-L23/P细胞、RPE1-hTERT细胞、H1876细胞
C3H/10T1/2 clone 8细胞系相关产品：TE 32细胞、PIG1细胞、RPMI-8402细胞
786.O细胞系相关产品：NCIH2347细胞、Caov-3细胞、NCIH1838细胞
Buffalo Rat Liver-3A细胞系相关产品：VMRCLCD细胞、Hs940.T细胞、Verda reno细胞
Panc04.03细胞系相关产品：NK92细胞、NF639细胞、Rabbit Kidney 13细胞
PA317细胞系相关产品：R 2 C细胞、Panc04.03细胞、H3396细胞
SK-MEL24细胞系相关产品：IGROV 1细胞、EFM192B细胞、COLO-1细胞
NB1RGB细胞系相关产品：SK-MEL-2-LUC细胞、H-1819细胞、SHIN-3细胞
U87MG细胞系相关产品：OE-19细胞、EFM-192C细胞、BHK 21细胞
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H1373细胞系相关产品：Opossum Kidney细胞、SUP-T1细胞、JEKO细胞
HCC-1569细胞系相关产品：WSUDLCL2细胞、AN3 CA细胞、Hs606T细胞
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SACC-83细胞系相关产品：LM-TK-细胞、SGC996细胞、HCC-38细胞
GM3190细胞系相关产品：RS4-11细胞、C17.2细胞、Hep 3B2.1-7细胞
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Hs 294T细胞系相关产品：NTERA-2 clone D1细胞、OVCAR.5细胞、CHL细胞
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SKMEL24细胞系相关产品：32D clone 3细胞、UMNSAH/DF-1细胞、RGC6细胞
OCI-LY-10细胞系相关产品：Tb1Lu细胞、OAW 42细胞、Tn-5细胞
HPC-Y5细胞系相关产品：GM02131A细胞、H1694细胞、IEC 6细胞
BALB/3T3 clone A31细胞系相关产品：CHO-ori细胞、RC-2细胞、LS-174细胞
SUM190PT细胞系相关产品：PLA-801C细胞、MLE 12细胞、NOMO1细胞
QSG7701细胞系相关产品：SKUT-1细胞、CCRF-SB细胞、PGBE1细胞
SG231细胞系相关产品：K7M2细胞、32Dc3细胞、MRMT-1细胞
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CF-PAC1细胞系相关产品：NCIH2452细胞、P30/Ohkubo细胞、NCC-IT细胞
Colon-26细胞系相关产品：LN 382细胞、PM6细胞、COLO 357细胞
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MC38细胞系相关产品：QG56细胞、H-1238细胞、OCM1A细胞
MS1细胞系相关产品：H1522细胞、MS-751细胞、YES-2细胞
HGBEC细胞系相关产品：BEAS-2B细胞、MGH-U1 (EJ)细胞、LNCaP C4-2B细胞
UMC11细胞系相关产品：U-373-MG细胞、KRC/Y细胞、NTERA-2 cl.D1细胞
OVCAR-8/ADR细胞系相关产品：Psi2 DAP细胞、MDAMB134VI细胞、X63-Ag8-653细胞
HRA-19细胞系相关产品：NCI-H441细胞、aTC1-6细胞、HL 60细胞
LO2细胞系相关产品：IOSE 29细胞、NR 8383细胞、Hs 695T细胞
KYSE 520细胞系相关产品：H2122细胞、RC-4B/C细胞、NCIH889细胞
CG4细胞系相关产品：PaTu 8988s细胞、PLC/PRF/5细胞、HCC1954-BL细胞
PE/CA-PJ-34细胞系相关产品：SK-OV-433细胞、SUM52细胞、S-16细胞
HT-1197细胞系相关产品：766T细胞、GA-10 (Clone 4)细胞、HCT-8/V细胞
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