JVM-3 Thawing人慢性髓白血病细胞系

"JVM-3 Thawing人慢性髓白血病细胞系
细胞背景资料：慢性髓白血病；女性
细胞形态：淋巴母细胞样
JVM-3 Thawing人慢性髓白血病细胞系
细胞生长：悬浮
细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升高到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气的，大家争取做到因材施教，比如试试下面的“四步消化法”。（以难消化细胞为例），具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍（目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉）。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况把握）。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
JVM-3 Thawing人慢性髓白血病细胞系
细胞生长特性：悬浮
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为３００xg(约１,０００rpm)，５-１０分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含５-１０%DMSO(dimethyl sulfoxide)和９０-９５%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于４°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于４°C ３０~６０分钟→ (-２０°C ３０分钟)→-８０°C １６~１８小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降１-３°C至–８０°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-２０°C不可超过１小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-８０°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为１x１０(６)cells/ml vial，融合瘤细胞则以５x１０(６)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。
细胞形态特性：详见细胞说明书
HeLaS3细胞系相关产品：KP-N-RT-BM细胞、HCC0202细胞、AC29细胞
HUVEC细胞系相关产品：QG-56细胞、HCC0078细胞、CL1-5细胞
Jurkat E6细胞系相关产品：JHH-2细胞、P3J-HR-1细胞、MOLM13细胞
F81细胞系相关产品：UPCI-SCC-90细胞、Natural Killer-92细胞、BHK21细胞
HR8348细胞系相关产品：DHL10细胞、LS174T细胞、DMS153细胞
RD-2细胞系相关产品：Hs 675.T细胞、MDA453细胞、MES-13细胞
Hs 840.T细胞系相关产品：SUIT-2细胞、HCC-2279细胞、Human Liver-7702细胞
AtT 20细胞系相关产品：HN13细胞、A549/ATCC细胞、MCF7/WT细胞
SK-MEL-3细胞系相关产品：HBZY-1细胞、GM07404D细胞、Strain L-929细胞
Mv1.Lu细胞系相关产品：MDA-MB-361细胞、H1975细胞、P3X63细胞
32D clone 3细胞系相关产品：A875细胞、MDA231-LM2细胞、N-9细胞
AMO1细胞系相关产品：RKO-AS-45-1细胞、MHCC 97-L细胞、OPM2细胞
SK_N_FI细胞系相关产品：UMUC1细胞、SUDHL4细胞、HMC-1细胞
NCI/ADRRES细胞系相关产品：118 MG细胞、WiDr/S细胞、ACCM细胞
CAL-148细胞系相关产品：253J-Bladder-V细胞、Soleus clone 8细胞、ECC-10细胞
IEC 18细胞系相关产品：H865细胞、DMS273细胞、RCM-1 [Human rectum adenocarcinoma]细胞
H735细胞系相关产品：Hs 934.T细胞、IPLB-Sf21AE细胞、CAL 12细胞
Hs706T细胞系相关产品：SR786细胞、JC细胞、Panc02细胞
EA hy 926细胞系相关产品：GM00637B细胞、SUDHL-6细胞、HS-68细胞
HS 683T细胞系相关产品：NCI-H522细胞、U266细胞、3T3-Swiss细胞
293GP细胞系相关产品：BT.549细胞、H-23细胞、R3/1细胞
Simpson细胞系相关产品：RERFLCMS细胞、TE-9细胞、UMRC-2细胞
C4-I细胞系相关产品：BpRc1细胞、D-341 Med细胞、Hs 888.Lu细胞
SCL II细胞系相关产品：IBRS-2细胞、HO-8910细胞、J774.A1细胞
Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-8细胞系相关产品：AGS细胞、P388.D1细胞、P3X63 AG8-653细胞
FBHE细胞系相关产品：NCI-H1781细胞、A2780/CP细胞、MHCC97L细胞
JVM-3 Thawing人慢性髓白血病细胞系
LNT-229细胞系相关产品：H1435细胞、MAVER-1细胞、C-33A细胞
AAV-293细胞系相关产品：P19细胞、A1847细胞、HECV细胞
Panc203细胞系相关产品：SCH细胞、HCASMC细胞、Human podocyte细胞
Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-10细胞系相关产品：NHEK细胞、T-HEECs细胞、SV40-MES13细胞
MF2059细胞系相关产品：WM266mel细胞、HBL 100细胞、SU.86细胞
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PLB985细胞系相关产品：Pro-5WgaRI3C细胞、P30-OHKUBO细胞、Panc-05.04细胞
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KE-39细胞系相关产品：Hs706T细胞、SUP-B1细胞、T47D:A细胞
NCI-H1838细胞系相关产品：A3细胞、Strain V细胞、B16细胞
HEL-92细胞系相关产品：Hs 737.T细胞、NCIH1184细胞、PT-K75细胞
H2171细胞系相关产品：LS513细胞、293T/17细胞、HSC-4细胞
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LAPC4细胞系相关产品：EVSAT细胞、SNU886细胞、Bovine ENDometrial cells细胞
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AN-3细胞系相关产品：U373MG细胞、COLO 320细胞、HCM细胞
THP-1(ATCC)细胞系相关产品：J.E6-1细胞、BLO-11细胞、Vero 76细胞
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Porcine Kidney-13细胞系相关产品：H-1048细胞、P3HRI细胞、HPAF II细胞
RPMI 7951细胞系相关产品：X63.Ag8.653细胞、BEAS 2B细胞、SU-DHL-4细胞
TMD-8细胞系相关产品：293-FT细胞、SKNBE-2细胞、CEM-0细胞
TCam 2细胞系相关产品：COLO-320-HSR细胞、OCI-Ly 7细胞、LNT-229细胞
Hs840_T细胞系相关产品：LIXC002细胞、578T细胞、EoL-1 cell细胞
JVM-3 Thawing人慢性髓白血病细胞系
SNU-620细胞系相关产品：DoHH2细胞、NPC-TW01细胞、NCIH1435细胞
COLO824细胞系相关产品：U87MG细胞、G422细胞、H146细胞
CAL 85-1细胞系相关产品：Intestinal Epithelioid Cell line No. 18细胞、HIBEpiC细胞、SCC-7细胞
SMMC 7721细胞系相关产品：EBNA293细胞、NCIH1792细胞、H2347细胞
OAW 42细胞系相关产品：RMG-I细胞、ME-180细胞、RPMI no 8226细胞
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FLC7细胞系相关产品：GM00346B细胞、OVCAR8细胞、Nb2细胞
Y 1细胞系相关产品：MESSA/Dx5细胞、U-251-MG细胞、P3J HR-1细胞
OCUM-1细胞系相关产品：MDA-MB-157细胞、NCI-H1666细胞、HEK (AD293)细胞
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